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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎么把二抗洗下来？
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gss8285

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎么把二抗洗下来？

我的一抗是兔抗人血管内皮因子-2多克隆抗体，二抗是羊抗兔罗丹明B标记的IgG,现在想把二抗洗下来测荧光强度，不知道用什么能洗下来，还请各位虫友指教！
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1楼 2009-07-10 10:24:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
TBST多洗几次，比如洗个半小时，但无法保证能够洗得干净
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2楼2009-07-10 10:27:44
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gss8285

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-7-10 10:27:
TBST多洗几次，比如洗个半小时，但无法保证能够洗得干净

本人是学药化的，对生物这方面不是特别清楚。请问TBST是直接买的还是可以自己配置？
谢谢！
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3楼2009-07-10 10:31:53
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fkbp23

木虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎交流！ 7-10 12:45
TBS
Tris  50mM
NaCl 150mM   
用稀盐酸调pH值至7.5，室温保存。

TBST是在TBS中按1：1000（体积比）加入Tween 20.
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4楼2009-07-10 10:51:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
如果不想自己配制，也可以跟公司买TBS干粉，就是他们帮你称好放在一个袋子里面，然后开封加水溶即可
使用前加0.1%的Tween 20
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5楼2009-07-10 11:00:56
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gss8285

铜虫 (小有名气)
还有别的方法吗？因为我们实验室没有Tris.根据蛋白盐析原理用Nacl溶液洗行吗？
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6楼2009-07-10 11:14:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎交流！ 7-10 12:45
tris其实是维持pH环境的~~~
Tris碱很便宜啦，我们都是论公斤买的~~
据说用水洗也是可以的，不过，离子强度也是应该考虑的问题
非必要情况下不要擅改配方
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7楼2009-07-10 11:30:12
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