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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 怎样在要克隆的基因后面加一段45bp的序列？
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样在要克隆的基因后面加一段45bp的序列？ 已有1人参与

我想在一个基因后面加一段45bp的序列然后把这个基因克隆到pEGAD载体里，请问应该怎么设计引物比较好？我之前是直接把这段序列加在基因后面然后把这段序列设计在引物里，可是这样引物长度太长了，退火温度太高，基因p不出来，请问怎么解决啊？

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2020-05-20 21:26:39
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找idt 订一个oligo, 45bp+两个引物（分别在insert和backbone里）， 然后直接做两个insert的gibson/infusion就可以了
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2楼2020-05-21 07:05:40
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DNA甲基化

金虫 (著名写手)
设计引物的时候直接加上就可以，祝成功

发自小木虫IOS客户端
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3楼2020-05-21 08:22:32
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by DNA甲基化 at 2020-05-21 08:22:32
设计引物的时候直接加上就可以，祝成功

但是这样引物长度太长了，退火温度太高，基因p不出来啊，怎么解决呢？

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4楼2020-05-21 14:58:21
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