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关于对硝基苯酚法测定脂肪酶活性实验的问题
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请问哪位大佬做过这个实验啊？我用的底物是对硝基苯基月桂酸酯，不知道不同底物之间有没有很大的区别。 我溶解对硝基苯基月桂酸酯的方法是参照别人的文献，用80mg溶于5mmol/ml的100mL乙酸钠溶液中，加入1ml Triton X-100，水浴加热搅拌15分钟至溶解，后分装放置于冰箱4℃中保存，每次用之前，底物溶液是浑浊的，要水浴加热再冷却至室温才能再次溶解。但是时间长了之后，第五溶液会有一点黄色。 然后用这个底物溶液进行实验，无论是加酶的组还是空白组，当把底物溶液加入的瞬间，就会立即显示出黄色，反应一段时间后，空白组和加酶的组还是没有什么色差。我看有的人在小木虫上说生成的4-硝基苯酚对pH比较敏感，在碱性条件下显色比较稳定，我又往反应的溶液里加入碳酸钠溶液，可是空白组和加酶组都同时颜色更黄了，依然几乎没有色差。 麻烦各位实验大神帮我看看是什么情况，我是底物的溶解办法不对，导致底物很不稳定吗？还是有别的原因，我用的脂肪酶是L4277（Sigma），麻烦各位大神指教。 |
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2楼2020-12-08 09:45:30
Dreamliyao
新虫 (初入文坛)
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3楼2022-12-26 02:45:13
，正在做这个求教
4楼2023-11-20 14:45:11
