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thaw

铜虫 (小有名气)

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[交流] 求助pcambia Lacz alpha fragment 的作用

求助pcambia Lacz alpha fragment 的作用
最近构建载体，以pcambia1304为基础，发现多克隆位点在 Lacz alpha fragment 里面请问他的作用是什么，能切吗？
谢谢！

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1楼 2009-07-08 23:11:21

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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

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★ ★
thaw(金币+1,VIP+0):谢谢关注，是用来做什么的REPORTER 啊，再次谢谢！ 7-9 08:38
thaw(金币+1,VIP+0):再次谢谢 7-9 10:05

LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌.
该位点是用来做reporter用的，所以建议还是不要切掉

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会当凌绝顶，一览众山小

2楼2009-07-09 03:11:26

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anlewo7777

木虫 (正式写手)

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★ ★
thaw(金币+2,VIP+0):非常感谢 7-9 10:05

这段基因编码一段β半乳糖苷酶的亚基，而在大肠杆菌中只有另一个亚基，这两个亚基互补才能有酶活，所以只有转入质粒才能有β半乳糖苷酶酶活产生蓝斑，在这一片断中有多克隆位点如果插入其他片断是这一亚基不能表达或表达不正确就没有酶活不能分解X-gal 菌落还是白斑。如果你的外源片断是插入到边界序列中作农杆菌转化这些就没关系，你要检测质粒上的卡那抗性并检测你的片断是否插入。

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3楼2009-07-09 09:39:18

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louyiceng

4楼2010-02-12 12:59:21

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