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柴郡郡柴

新虫 (初入文坛)

[求助] LR重组出现了问题,求助

在寒假前BP重组构建了一批pDONR质粒,挑单克隆之后提了质粒送去测序。
测序用的是pDONR引物,结果是正确的,能blast出相应产物。
之后用这批pDONR去做LR重组,长的菌不是特别多,挑取单克隆后提质粒,然后去转染293T。但是转染的细胞做wb没有条带,什么条带都没有,连csfb条带也没有。
之后又挑菌做了菌液PCR,用的是扩增目的基因的时候使用的引物,没有扩出任何条带。
又重新换酶做了LR重组,克隆子也没有任何菌液PCR条带。
可能是什么地方出了问题呢?

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