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[求助]
LR重组出现了问题，求助
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在寒假前BP重组构建了一批pDONR质粒，挑单克隆之后提了质粒送去测序。 测序用的是pDONR引物，结果是正确的，能blast出相应产物。 之后用这批pDONR去做LR重组，长的菌不是特别多，挑取单克隆后提质粒，然后去转染293T。但是转染的细胞做wb没有条带，什么条带都没有，连csfb条带也没有。 之后又挑菌做了菌液PCR，用的是扩增目的基因的时候使用的引物，没有扩出任何条带。 又重新换酶做了LR重组，克隆子也没有任何菌液PCR条带。 可能是什么地方出了问题呢？ 发自小木虫IOS客户端 |
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