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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 标准葡萄糖的灭菌问题
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豆豆1985

[交流] 标准葡萄糖的灭菌问题

有谁可以帮忙分析一下这个培养基：10g/L的葡萄糖，5g/L酵母抽提物，10g/L碳酸氢钠，8.5g/L的磷酸二氢钠。基本没见过有人用该培养基啊。我最近试验中要用到。但是灭菌过程遇到了很多问题：该培养基刚配好是PH=7.8左右。但是灭菌后PH会有很大程度的升高，大概会达到8.6左右，这样就不能用于细菌的培养了，请求帮助。

[ Last edited by amisking on 2009-7-5 at 09:48 ]
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1楼 2009-07-05 09:38:09
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HarveyWang

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海外行者
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10g/L的葡萄糖，5g/L酵母抽提物，10g/L碳酸氢钠，8.5g/L的磷酸二氢钠。




每种成份都是要分开灭的哇。

培养基成份-------------------母液浓度

10g/L的葡萄糖---------- 500/L的葡萄糖
5g/L酵母抽提物-------- 100 g/L酵母抽提物
10g/L碳酸氢钠---------- 200 g/L碳酸氢钠
8.5g/L的磷酸二氢钠-- 100g /L的磷酸二氢钠。

灭菌的去离子水，最好灭上300 mL*3瓶（500mL摇瓶装）
灭菌的空摇瓶（250 mL和500 mL，用来配置和分装培养基）、枪头和量筒等。

最后，留一点已经配好的培养基用来测定pH。



按照比例将母液混合到一起，
然后加灭菌的去离子水补充好体积。
然后分装。

LS各位建议的超滤灭菌，
对于大体积溶液例如200-1000 mL，用来做细菌发酵的话，
太累人了。。。。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
10楼2009-07-06 08:42:27
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烟大考研

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0):支持观点！ 7-5 10:20
个人认为是高温下碳酸氢钠与磷酸二氢钠反应生产二氧化碳后逸出，剩余的部分大部分为磷酸氢钠和磷酸钠，导致pH升高。建议将10g/L碳酸氢钠，8.5g/L的磷酸二氢钠分别灭菌后再调pH，不过挺有难度啊，可以考虑采用滤膜过滤。
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
2楼2009-07-05 09:57:23
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豆豆1985

哦，谢谢。我试试看呢。
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3楼2009-07-05 10:07:28
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amisking

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引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2009-7-5 09:57:
个人认为是高温下碳酸氢钠与磷酸二氢钠反应生产二氧化碳后逸出，剩余的部分大部分为磷酸氢钠和磷酸钠，导致pH升高。建议将10g/L碳酸氢钠，8.5g/L的磷酸二氢钠分别灭菌后再调pH，不过挺有难度啊，可以考虑采用滤膜 ...

基本上支持这一观点，而且葡萄糖在高温灭菌的时候是会和蛋白质等物质发生美拉得反应的。
而且碳酸氢钠、磷酸二氢钠也是一个ph的缓冲物质，调节的时候有一定的困难。需要多多研究下！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
4楼2009-07-05 10:22:38
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zplipeng

金虫 (著名写手)
LZ 在刚配的时候把pH值调的 低一点
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
5楼2009-07-05 10:48:09
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yanlili

金虫 (正式写手)
用过滤除菌吧，免得遇到这么多问题，现在过滤除菌也很简单，所需物品都可以买，也不怎么贵
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6楼2009-07-05 12:36:16
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haichang

银虫 (小有名气)
可以在灭菌的过程中 把培养基容器密闭 譬如用血清瓶分装 采用做厌氧的培养基方式
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时不我待
7楼2009-07-05 16:52:30
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zhuangqli

金虫 (小有名气)
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建议楼主应该在灭菌前调PH
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8楼2009-07-05 17:00:28
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qwj_1001

木虫 (著名写手)
建议换用缓冲溶液
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我们来自五湖四海为了一个目标聚集在这里，使我们获得知识。
9楼2009-07-05 21:30:27
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