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真好呀ya

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by biosci at 2020-04-07 21:33:07
都不如质谱最准确。
...

我们没用质谱

发自小木虫Android客户端
11楼2020-04-07 21:39:25
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在蛋白异源表达的实验中,将目的蛋白基因克隆至载体,构建好的就是重组载体,转化至宿主细胞进行目的蛋白表达,获得的高量表达蛋白就是重组蛋白。这里需要注意的是,有些重组载体构建时,会带有相应蛋白标签,多用于目的蛋白的分离纯化,这时候携带标签的蛋白  
通常叫做融合蛋白(比如GST-目的蛋白,His-目的蛋白等),当蛋白标签GST、His被切除后,获得的蛋白才是你的目的蛋白。
  当然,目的蛋白的定义是相对的,其实还是根据你实验的目的来确定的,他并不是一个通用特定的名字,比如你进行蛋白表达目的是为了获得与原始氨基酸序列一致的蛋白,那么你的目的蛋白就是这个分子量的大小的蛋白,如果你的实验目的是为了获得一个携带标签的融合蛋白,那么在这个实验里,融合蛋白就是你的目的蛋白。
  如果是简单的蛋白克隆异源表达,通过page胶基本就可以确定目标蛋白分子量位置是否有表达(这里要注意你的载体构建时是否携带标签,如果携带,那么PAGE胶中就要考虑到标签的分子量)。当然如果是抗体类的产品,可能需要更加严格的实验来判断分子量的准确性。
   祝好
天空才是极限,我有信心飞的更高!
12楼2020-04-08 11:48:14
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真好呀ya

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2020-04-08 11:48:14
在蛋白异源表达的实验中,将目的蛋白基因克隆至载体,构建好的就是重组载体,转化至宿主细胞进行目的蛋白表达,获得的高量表达蛋白就是重组蛋白。这里需要注意的是,有些重组载体构建时,会带有相应蛋白标签,多用于 ...

好的好的感谢解惑,蟹蟹啦

发自小木虫Android客户端
13楼2020-04-08 14:42:17
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