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真好呀ya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by biosci at 2020-04-07 21:33:07
都不如质谱最准确。
...

我们没用质谱

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11楼2020-04-07 21:39:25
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在蛋白异源表达的实验中，将目的蛋白基因克隆至载体，构建好的就是重组载体，转化至宿主细胞进行目的蛋白表达，获得的高量表达蛋白就是重组蛋白。这里需要注意的是，有些重组载体构建时，会带有相应蛋白标签，多用于目的蛋白的分离纯化，这时候携带标签的蛋白  
通常叫做融合蛋白（比如GST-目的蛋白，His-目的蛋白等），当蛋白标签GST、His被切除后，获得的蛋白才是你的目的蛋白。
  当然，目的蛋白的定义是相对的，其实还是根据你实验的目的来确定的，他并不是一个通用特定的名字，比如你进行蛋白表达目的是为了获得与原始氨基酸序列一致的蛋白，那么你的目的蛋白就是这个分子量的大小的蛋白，如果你的实验目的是为了获得一个携带标签的融合蛋白，那么在这个实验里，融合蛋白就是你的目的蛋白。
  如果是简单的蛋白克隆异源表达，通过page胶基本就可以确定目标蛋白分子量位置是否有表达（这里要注意你的载体构建时是否携带标签，如果携带，那么PAGE胶中就要考虑到标签的分子量）。当然如果是抗体类的产品，可能需要更加严格的实验来判断分子量的准确性。
   祝好
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
12楼2020-04-08 11:48:14
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真好呀ya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2020-04-08 11:48:14
在蛋白异源表达的实验中，将目的蛋白基因克隆至载体，构建好的就是重组载体，转化至宿主细胞进行目的蛋白表达，获得的高量表达蛋白就是重组蛋白。这里需要注意的是，有些重组载体构建时，会带有相应蛋白标签，多用于 ...

好的好的感谢解惑，蟹蟹啦

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13楼2020-04-08 14:42:17
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