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【原创】精华中的精华-海参皂苷
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海参皂苷的生物学活性和制备 现代药理研究结果显示，海参皂苷具有广泛的药理活性，具有抗有丝分裂、抗病毒、抗真菌、抗辐射、抗肿瘤等药理活性，已成为研制开发新药的一个来源。 1.抗肿瘤及免疫调节 Sedov等考察了瓜参苷(cucumarioside)对百日咳疫苗在体内的免疫应答作用,结果发现瓜参苷的给药剂量和给药途径具有显著的免疫调节作用。当实验用小鼠口服给药4mg/只或腹腔注射给药0•04~0•0004mg/只时,瓜参苷会增强百日咳疫苗的保护作用。黄添友等考察了海参提取物对EB病毒感染鼻咽癌患者外周血B细胞的影响,结果表明海参提取物诱导细胞对EB病毒感染鼻咽癌患者外周血B细胞的激活、增殖与分化有明显的抑制作用,其机理可能与CD4和CD8细胞被激活有关。邹峥嵘等对其新发现的三种海参皂苷In-tercedensidesA, B, C进行活性筛选,结果发现IntercedensidesA对小鼠Lewis肺癌和S180肉瘤有显著的抑制活性,同时这三个化合物在0•6~4•0mg/mL的浓度范围内对所有被筛选的10种肿瘤细胞表现出一定的细胞毒性。巫军等通过对黑乳海参体内化学成分的系统研究,分离得到一个含量丰富的水溶性皂苷nobilisideA,其毒性极小,具有很强的抗肿瘤及抗真菌活性,可以作为新型抗肿瘤和抗真菌药物的候选化合物和先导化合物。 2.溶血作用及生物毒性 1955年, T. Yamanouchi从海参分离得到一种具有溶血作用和毒鱼活性的海参皂苷。Mats等发现从海参分离的皂苷混合物(holotoxinsA1 and B1)具有抑制排卵和刺激子宫收缩的作用,所以海参皂甙可以开发成避孕药品。Anisimov等的研究发现海参皂苷毒性比植物性皂苷的毒性强,海参在排卵前后其体内的皂苷含量最高,海参皂苷能够抑制卵母细胞的成熟而起到调节海参繁殖过程的作用。 Santhakumar的研究表明,海参皂苷能够抑制DNA和RNA的合成,引起细胞有丝分裂过程异常和蛋白质合成的障碍,从而产生抗有丝分裂效应抑制细胞增殖。闫冰等糙海参分离鉴定了5个三萜皂苷化合物,化合物l为首次以原生产物形式得到的单体天然产物, 2~5为首次从糙海参中分离得到, 5个化合物均显示显著的体外细胞毒活性。 抗菌作用 Sedov等研究发现,瓜参苷对各种革兰氏阴性菌有显著的抑制作用通过腹腔给药,被感染小鼠的治愈率能达到90%。丛日山等从冻干海参加工废液中提取了水溶性海参皂苷,并对其抗真菌活性进行了研究。研究表明,水溶性海参皂苷对酵母菌具有很强的抑菌活性,对农业致病菌─黄瓜枯草病原菌和葡萄炭疽病菌以及黑曲霉菌,也具有显著的抑菌活性。 浸提 海参皂苷极性较大,易溶于水、稀醇、热甲醇和乙醇中,难溶于丙酮,几乎不溶或难溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。海参皂苷在含水丁醇或戊酸中有较大的溶解度,因此丁醇或戊醇常作为从水液中分离皂苷的萃取溶剂,从而与糖、蛋白质等亲水性大的成分分离。常用的提取方法有醇提法和树脂吸附法。 醇提法 甲醇或乙醇提取,回流或冷浸提取2~3次,减压浓缩为浸膏状,加水溶解后,用乙醚或石油醚脱脂,三氯甲烷去除蛋白后,用水饱和的正丁醇萃取提取液,减压浓缩干燥后得到海参总皂苷。 树脂吸附法 甲醇或乙醇提取后,减压浓缩成浸膏后,加水溶解并上样于大孔树脂柱中,依次用去离子水和乙醇溶液进行洗脱,收集乙醇的洗脱组分,减压浓缩至浸膏状,加水溶解后,水饱和的正丁醇萃取减压浓缩,真空冷冻干燥得到海参总皂苷。 分离纯化 由于皂苷亲水性大,难以分离提纯,有些皂苷结构差别又不大,获得单体较为困难。因而需要多种手段综合对其进行分离纯化。 醇提-醚(酮)沉淀法:利用皂苷难溶于乙醚、丙酮等溶剂的性质,将粗皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中,然后逐滴加入乙醚、丙酮或乙醚-丙酮的混合溶剂(加入的量以能使皂苷从醇溶液中析出为限),边加边摇匀,皂苷即析出开始析出的沉淀往往含杂质较多,继续加入乙醚可得到纯度较高的皂苷。也可反复处理数次,并逐渐降低溶剂极性,不同的皂苷就可分批沉出,达到分离的目的。分段沉淀法虽然简便,但是难以将皂苷完全分离,不易获得纯品。 硅胶柱层析:一般以氯仿-甲醇-水混合溶剂梯度洗脱,它对一些分离度差别较大的化合物起到较好的分离效果。但其对分离差别小的化合物效果差,操作时间长,溶剂耗费量大。 反相硅胶柱层析:将硅胶和十八硅烷键合,即可制得反相硅胶。常用的有LichroprepRp-8和LobarRp-8,以梯度甲醇水溶液进行对皂苷洗脱,极性大的成分先被洗脱出来。 大孔吸附树脂法:是一类具有大孔结构的高分子化合物,能用于总皂苷的纯化,可除去部分蛋白,色素、多糖和无机盐等一些水溶性杂质。其特点是吸附容量大,选择性好,易于解吸附，机械强度强,再生处理方便,吸附速度快。常用的吸附树脂有D101、XAD-2、AB-8、HP-20等型号树脂。 葡聚糖凝胶层析法:是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据海参皂苷的分子大小不同来进行分离。该法可应用于皂苷和其他组分的分离或不同皂苷组分的分离。葡聚糖层析常用的凝胶有SephadexLH-20, G-10, G-25等。 高效液相层析法(HPLC):常在海参皂苷的进一步分离纯化中使用。HPLC使用硅胶、反相硅胶或其它碳水化合物作色谱柱填料,采用适合的压力和流动相,能够很好地分离皂苷各组分。 |
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