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亲和介质的组成
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基质 基质用于吸附配基，具有理化惰性，可以支持配基通过直接或间接的方式偶联到基质上。高效的色谱基质应具有以下特性： 1.具有相当低的非特异性吸附，其根本原因是由于亲和色谱的成功依赖于特异性的相互作用 2.糖残基上的羟基基团容易被衍生化，可以使配基共价附着在上面，为形成亲和介质提供一个理想的平台 3.具有开放的孔状结构，保证高容量结合，甚至可以结合大的生物分子，基质的惰性对于配基的吸附作用是有效的 4.具有好的流动特性，适于快速分离 5.在实验所需要的范围内具有稳定性 配基 配基能够可逆的结合特定目标分子或者目标分子基团的分子 在亲和色谱纯化中，配基的选择受两种因素影响：配基与目标物的结合必须具有特异性和可逆性，并且必须具有化学修饰基团，可以使它吸附在基质上，并且不损害它的活性 间隔臂 通过克服任何空间位阻效应，提高基质和目标分子的结合 目的蛋白的结合位点经常位于分子中较深的部位，并且一个亲和介质的制备是通过偶联小的配基，例如酶辅助因子，将其直接偶联到Sepharose上，因此由于空间位阻的影响，目标蛋白质与配基仅能够展示出较低的结合能力，例如配基不能接近目标分子的结合位点，在这些环境中，在基质和配基之间插入一个“间隔臂”可以使结合更加容易。间隔臂的设计必须使结合达到最大化，但需要避免非特异性结合效应。 |
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2楼2020-03-27 08:58:32