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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒测序急救!
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695

木虫 (职业作家)

[交流] 质粒测序急救!

我用的GME T质粒，纯化后质粒和酶切结果都正常，但是到用SP6-T7的时候PCR产物就不是很正常，目的带是有。第一次曾用PCR产物中的目的带拿去测序，结果发现正向引物与已知序列一致性很高，反向引物的测序信号几乎没有，然后送质粒再测，结果几乎是一样的，大家帮我分析我该怎么做吧？多谢了不甚感激！
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1楼 2009-07-03 06:14:26
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是引物设计的不好。。。。
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 08:40:56
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biosafety

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1）可能你的目的片段中含有测序引物T7或SP6相似的序列，你可以换测序引物，pGEM-T载体还有一对测序引物M13F和M13R，你可以试试。
2）如果还是不行，可以直接测你原来连接的PCR产物，用扩增引物做测序引物。
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科学-哲学-神学-玄学
3楼2009-07-03 09:21:09
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honghui9251

铜虫 (小有名气)
染菌了！
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4楼2009-07-03 11:11:47
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