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695

木虫 (职业作家)

[交流] 质粒测序急救!

我用的GME T质粒,纯化后质粒和酶切结果都正常,但是到用SP6-T7的时候PCR产物就不是很正常,目的带是有。第一次曾用PCR产物中的目的带拿去测序,结果发现正向引物与已知序列一致性很高,反向引物的测序信号几乎没有,然后送质粒再测,结果几乎是一样的,大家帮我分析我该怎么做吧?多谢了不甚感激!
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是引物设计的不好。。。。
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 08:40:56
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biosafety

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1)可能你的目的片段中含有测序引物T7或SP6相似的序列,你可以换测序引物,pGEM-T载体还有一对测序引物M13F和M13R,你可以试试。
2)如果还是不行,可以直接测你原来连接的PCR产物,用扩增引物做测序引物。
科学-哲学-神学-玄学
3楼2009-07-03 09:21:09
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honghui9251

铜虫 (小有名气)

染菌了!
4楼2009-07-03 11:11:47
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