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victor_u

新虫 (小有名气)

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[交流] 分子筛柱使用的几点建议已有2人参与

当分子筛柱子（凝胶过滤介质）使用了一段时间后，可能需要清除沉淀在柱子里的蛋白质或其他可能积聚在柱上的污染物。
   如以下情况下可能需要清洁：
   1. 在色谱柱的顶部可以看到一个彩色的条带；
   2. 在柱材上方和柱床表面之间出现空间；
   3. 分离度降低；
   4. 背压显着增加。

   第二段会给出Superdex凝胶过滤介质的详细清洁程序。

Cleaning

1.用1个柱体积的0.5 M NaOH以25 cm / h的流量洗涤（10/300 GL为0.33 ml / min，HiLoad 16/60为0.8 ml / min，HiLoad 26/60为2.2 ml / min）去除大多数非特异性吸附的蛋白质。
2.用25毫升/小时的1倍柱体积的蒸馏水洗涤
3.用2倍柱体积的缓冲液以50 cm / hr的流量（10/300 GL为0.4 ml / min，HiLoad 16/60为1.6 ml / min或HiLoad 26/60为4.3 ml / min）重新平衡。直到在A 280处监测到基线，并且洗脱液的pH值稳定为止。
如果缓冲液中含有去污剂，则可能需要进一步平衡。
建议每10–20次分离后进行常规清洁，但是清洁的频率还取决于所应用样品的性质。

Removing.severe.contamination

1.逆向流动并在室温下以25 cm / h的线性流速洗涤。
2.先用4倍柱体积的1 M NaOH洗涤（以除去疏水蛋白或脂蛋白），再用4倍柱体积的蒸馏水洗涤。
3.用0.5柱体积的30％异丙醇洗涤，以除去脂质和疏水性强的蛋白质，然后用2柱体积的蒸馏水洗涤。
4.在开始新的分离之前，至少用5倍柱体积的缓冲液平衡柱，或直到在A 280监测的基线和洗脱液的pH值稳定为止。
对于极端的污染情况，请查阅产品随附的说明。

在所有情况下，预防胜于治疗，建议常规清洁。如果在压力监视器上或看到凝胶介质表面向下移动观察到背压增加，请在开始清洁柱子前确认这种情况是否由色谱柱引起。从收集器开始，依次断开设备中的各组件，然后启动泵，并检查每一个断开组件后的压力。其中，在线过滤器堵塞是增加背压的常见原因。在每次运行时，需要检查仪器接通相同组件状态下的背压，因为背压会随着仪器的运行发生变化，例如在进样过程中或更改为其他缓冲液时。同时，始终使用过滤后的缓冲液和样品，以减少额外的色谱柱维护需求；在运行过程中，始终使用脱气的缓冲液，以避免在填充柱中形成气泡；缓冲液，预装色谱柱和样品应保持在同一温度下，以防止在色谱柱中形成气泡；使用前过滤清洁溶液，并在下一次分离之前始终用2–3倍柱体积的缓冲液重新平衡柱。

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