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liubang8355

金虫 (小有名气)

[交流] 这样做DNA会降解吗?

我想用一种从植物中提取的(据说有切割闭合双螺旋DNA)的蛋白来验证此实验,1应采取哪些措施才能阻止或避免其他因素降解DNA?2.该蛋白不除去会影响DNA电泳结果吗?蛋白分子量为3万左右
(或者有什么好的建议请指教)

主要过程就是在缓冲液中加PUC18和该蛋白在37度水浴一小时,跑琼脂糖电泳看是否切开
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glucidum

金虫 (正式写手)


liubang8355(金币+1,VIP+0): 7-1 23:16
一般细胞内是有DNA外切酶的,这些酶对闭合环状pUC18应该没有影响.
3楼2009-07-01 10:14:59
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yanlili

金虫 (正式写手)



liubang8355(金币+1,VIP+0): 7-1 23:14
一般来说不会降解吧,DNA酶在自然环境中还是比较少的,用的离心管啊,枪头之类的要灭好菌。
2楼2009-06-30 20:52:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


liubang8355(金币+1,VIP+0): 7-1 23:16
无DNase的环境
轻柔无剧烈物理剪切力的操作
适宜的缓冲环境
也就差不多了

电泳?过柱纯一下就是了,或者酚抽提一下

另外,做好对照组就能充分说明问题
5楼2009-07-01 10:50:43
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yang0071

木虫 (职业作家)


liubang8355(金币+1,VIP+0): 7-1 23:16
酶切时间点  蛋白浓度都作个梯度
当然对照是最基本的东西
6楼2009-07-01 11:02:26
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