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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE相关问题，求助大神
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只是念而已

新虫 (小有名气)

[求助] 3'RACE相关问题，求助大神 已有1人参与

小白一个，最近打算做3'RACE，可是在引物设计的时候出现了疑惑，用的是takara的3'RACE试剂盒。请问我设计GSP1和GSP2的引物是不是在我已知序列的sense链上设计啊？而且要靠近5'端是吗？引物设计有什么要求呢？求大神不吝赐教~~
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1楼 2020-02-23 21:21:26
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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只是念而已: 金币+5 2020-03-28 10:38:23
是的，在已知序列上设计，并且退火温度要高

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2楼2020-02-23 21:43:48
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蜗牛婷

木虫 (正式写手)
在sense链上设计引物，引物设计3’不能有互补序列，选择3’特异性高的引物，可以一次性多设计几条，用相同的模版，不同的引物，同时做pcr

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趁着年轻，多做些事情，给年老的自己留下些许美好的回忆。
3楼2020-02-25 01:57:32
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只是念而已

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2020-02-23 21:43:48
是的，在已知序列上设计，并且退火温度要高

谢谢您~
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4楼2020-02-25 14:37:04
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只是念而已

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蜗牛婷 at 2020-02-25 01:57:32
在sense链上设计引物，引物设计3’不能有互补序列，选择3’特异性高的引物，可以一次性多设计几条，用相同的模版，不同的引物，同时做pcr

请问引物设计3'不能有互补序列是什么意思啊？ 那个sense链就是我在数据库里面的得到的序列的sense链对吗？谢谢您
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5楼2020-02-25 14:38:19
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蜗牛婷

木虫 (正式写手)
你可以用primer5进行分析选择引物，那个软件上面会提示3’有没有跟其他的序列互补。3’race pcr引物从sense链上找

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趁着年轻，多做些事情，给年老的自己留下些许美好的回忆。
6楼2020-03-01 00:51:36
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只是念而已

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜗牛婷 at 2020-03-01 00:51:36
你可以用primer5进行分析选择引物，那个软件上面会提示3’有没有跟其他的序列互补。3’race pcr引物从sense链上找

好的 谢谢你~
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7楼2020-03-02 11:03:31
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