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铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 关于原位杂交溶液配制的一些问题

各位虫友，最近需要做一些植物原位杂交的实验，网上看过一些操作流程，原理基本知晓，下来准备自己动手试试了。一开始就是溶液的配制，发现好些流程上没有具体说明配制的注意事项，不知道如何配制最好，所以想向大家讨教讨教，不舍感激！
      1. 配制母液时有两种办法，一种是先配制好灭菌的DEPC水，再拿灭菌的DEPC水配制各个母液，这样能否确保配制出来的溶液是RNA酶free的吗；另一种是先配制0.1%DEPC水，暂且不灭活，直接拿没有灭火的DEPC水配制各个母液，待都配制好后再行灭菌去掉残余DEPC。这两个明显后者感觉耕可靠些，就是麻烦，到底前一中配制方法是否可行？

   2. 有些帖子和虫友说TRIS配制时不可用DEPC处理，具体原因是什么？还有人说可以用已经配置好的DEPC水直接溶解TRIS，然后再灭菌就可以了。两种说法到底哪个是对的？为什么？原位杂交时TRIS缓冲液必须要求是RNA酶free的，要用DEPC 配制含有TRIS的缓冲液，该如何配制合适？

   3. 50%硫酸葡聚糖如何配制？我用没有灭火的DEPC水搅拌半小时，发现基本呈混沌状，很难澄清，静止一段时间后呈半澄清状，用这样的溶液灭菌后可否能用啊？应该怎么配制啊？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 21:09 ]

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