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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教：NO(一氧化氮)生成测定
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yesvsno

金虫 (小有名气)

[交流] 求教：NO(一氧化氮)生成测定

有几个天然产物，想做抑制NO生成活性，尝试了以下条件，均没成功

cell：RAW264.7  J774.1
培养基：1640  DMEM (10% FBS 含酚红)
LPS浓度 10ug/mL  1ug/mL

NO的生成用griess试剂测NO2-

LPS组的NO水平总是上不去，和ctrl差不多，不知何故？

求教有这方面的经验的大虫给点建议

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-3 at 09:10 ]
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1楼 2009-06-29 14:18:52
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HarveyWang

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Griess试剂测NO2-

其发色产物的吸收峰特征值为520-550 nm（发红色），一般是在这个范围测定的。

那么，在这个测定值上，培养基中的酚红很可能造成较高的背景，显不出实验组和对照组的差别。

建议使用不含酚红的培养基。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-06-29 16:43:47
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yesvsno

金虫 (小有名气)
谢LS，但是LPS组的NO2-没有上去，文献报道是几十微摩，我的只有十几微摩

本底问题可能会有影响，但应该不是本实验的决定因素
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3楼2009-06-29 21:45:49
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yesvsno

金虫 (小有名气)
今天又做了一次实验，用的无酚红培养基，LPS组的NO还是上不去，不知何故？望高手指点
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4楼2009-07-01 17:45:34
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HarveyWang

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海外行者
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引用回帖:
Originally posted by yesvsno at 2009-7-1 17:45:
今天又做了一次实验，用的无酚红培养基，LPS组的NO还是上不去，不知何故？望高手指点

还两个可能原因：
（1）培养基里含有较高浓度的还原类物质。例如Vc 、DTT、 Fe2+等（uM水平），这些物质会严重干扰NO2-的测定，使其吸光值急剧降低。

（2）NO2-产生的量 实在是很低。 建议 增加药剂浓度 或 延长孵育时间 试试。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-07-02 02:55:07
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zhangeping

银虫 (正式写手)
增加LPS的浓度试试！
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6楼2009-07-02 17:07:26
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yesvsno

金虫 (小有名气)
LPS我用的三个浓度，10，1，0.1 ug/mL，10 和 1 差不多，0.1 稍微差些

NO水平都比control高一点点

而且不知为何，本底也很高

本底吸光值0.1，LPS组 0.16

[ Last edited by yesvsno on 2009-7-2 at 20:01 ]
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7楼2009-07-02 19:57:49
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zhangeping

银虫 (正式写手)
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把酚红去掉，加大LPS的浓度！
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8楼2009-07-03 09:03:26
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