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【求助】DGGE切胶回收方法
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| 我做ＤＧＧＥ切胶回收用的方法是胶条捣碎后放入５０μＬ的无菌去离子水中4℃过夜，可是做PCR时都扩不出来，扩增时加入模版的量已经做过梯度。所以估计还是回收的问题，但是都用的是大家普遍用的方法，可是为什么不行，希望高手帮忙指点，先谢了！ |
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2楼2009-06-28 10:24:40
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kongsun(金币+2,VIP+0):^_^，很详尽的回复嘎，谢谢！ 6-29 20:01
jiangxuefei(金币+2,VIP+0):很细致，非常感谢！ 7-6 17:15
kongsun(金币+2,VIP+0):^_^，很详尽的回复嘎，谢谢！ 6-29 20:01
jiangxuefei(金币+2,VIP+0):很细致，非常感谢！ 7-6 17:15
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胶先捣碎，加适量的TE buffer（要全部没过胶，大概100ul够了）； 4度放置24h； 12000离心5m，液体转到新的管子； 加入2-3倍体积（是加入TE的体积）的无水乙醇，-20度沉淀24h， 12000 离心5m； 弃上清（注意用枪吸，要小心不能把DNA悬浮起来）； 挥发一段时间（以无酒精味为准） 加入适量的TE保存（如果觉得你的DGGE条带本身就不亮就少加一点，一般我加50ul）； 吸取1ul做模板做PCR 如果失败请加大模板量，5ul，10ul都无所谓。 一般50ul体系5ul模板都能扩出来。条带不亮没关系，割胶回收够用就行。 差不多就这些了，祝楼主早日成功! |
3楼2009-06-28 11:14:47