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gwen6356

铁虫 (小有名气)

[交流] zeocin筛选稳定细胞系问题 已有3人参与

请问各位高手,zeocin筛选稳定细胞系会不会因为浓度高而使细胞死亡,我老板说只要是稳定的细胞系了,就不会被杀死,可是我的稳定细胞状态一直不如正常细胞好,会不会跟zeocin有关呢?
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yixinling

金虫 (正式写手)

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看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-23 16:00:30
引用回帖:
Originally posted by gwen6356 at 2009-06-23 13:35:56:
请问各位高手,zeocin筛选稳定细胞系会不会因为浓度高而使细胞死亡,我老板说只要是稳定的细胞系了,就不会被杀死,可是我的稳定细胞状态一直不如正常细胞好,会不会跟zeocin有关呢?

做个不同浓度的zeocin在你这个野生细胞上的杀伤曲线,能够杀死的浓度就可以了,太高了么总归不好的。
3楼2011-03-23 15:59:39
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315090231

新虫 (小有名气)

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看天(金币+3): 鼓励分享和交流 2011-03-23 16:00:19
引用回帖:
Originally posted by gwen6356 at 2009-06-23 13:35:56:
请问各位高手,zeocin筛选稳定细胞系会不会因为浓度高而使细胞死亡,我老板说只要是稳定的细胞系了,就不会被杀死,可是我的稳定细胞状态一直不如正常细胞好,会不会跟zeocin有关呢?

不知道你的问题是否解决,我最近也在用zeocin筛选稳定细胞系,之前我分别转了三个质粒,到现在是细胞筛选的第九天,其中一个质粒出现了克隆,但是形态并不是特别好,多角形,我观察这个质粒克隆出现的时间是细胞一边死亡,克隆一边生长。而另外两个质粒转染的细胞12个6孔板都只出了3-4个形态不是很好的克隆而且现在6孔板里的细胞基本都是死光的状态,只有极少数的细胞存在。我想问下你当时是加药多少天后大量出现细胞克隆的?还是这个抗性出的克隆就很少?求教啦!
2楼2011-03-22 22:21:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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看天(金币+2): 鼓励回答 2011-03-24 21:20:21
不要随便加高抗生素的浓度,到时候筛出来耐药株而不一定是高产株
严格按照预实验摸的剂量做

而且筛稳定株因为细胞经过多次传代,自然状态会比原来的细胞差一点的
4楼2011-03-23 22:10:51
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