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fykxy_206

木虫 (正式写手)

引物是不是有点少了?
11楼2009-06-24 12:14:09
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amilie030312

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先筛选退火温度,建议做梯度,找到最适合的退火温度。你那个不是目的片段微弱的问题,是说明你模板量太大了,才产生了拖带,建议你用0.5-1微升的模板量来跑,只做PCR的话25-28个循环就足够了,如果你是检测那现在的结果已经可以了,如果是要做克隆那建议你第一次PCR的模板稀释100倍然后进行二次PCR再纯化回收。
12楼2009-06-24 14:00:53
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

怎么有的说模版多了,有的说模版少了啊,那我就各试一次吧!
13楼2009-06-25 10:22:14
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baiyidao

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得做一个退火温度梯度试试!
14楼2009-06-25 15:28:23
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板不需太多
退火温度可设一个梯度
dNTP浓度是多大的,感觉有点少
15楼2009-06-25 15:40:59
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
降低退回温度
因为要回收循环次数不能太高最好30以内
可以考虑不回收直接连载体然后挑阳性克隆验证
16楼2009-06-25 15:46:12
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dailei1983

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能是模板量太高了,有时候模板浓度太高会抑制PCR反应。
可以试一下0.5μL,1μL,2μL模板,其他不变,看看有没有分别。
还是不行,就拿第一次产物做模板再做一次PCR,应该就没什么问题了。
17楼2009-06-25 16:49:37
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

谢谢大家!
18楼2009-06-25 21:28:03
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yyn0452

木虫 (正式写手)


表达效率低了吧
19楼2009-06-25 22:01:07
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

表达效率低了?那有没有什么改进的措施呀?
20楼2009-06-27 18:56:59
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