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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR目的条带比较微弱？（附图）
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
引物是不是有点少了？
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11楼2009-06-24 12:14:09
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先筛选退火温度，建议做梯度，找到最适合的退火温度。你那个不是目的片段微弱的问题，是说明你模板量太大了，才产生了拖带，建议你用0.5-1微升的模板量来跑，只做PCR的话25-28个循环就足够了，如果你是检测那现在的结果已经可以了，如果是要做克隆那建议你第一次PCR的模板稀释100倍然后进行二次PCR再纯化回收。
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12楼2009-06-24 14:00:53
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
怎么有的说模版多了，有的说模版少了啊，那我就各试一次吧！
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13楼2009-06-25 10:22:14
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得做一个退火温度梯度试试！
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14楼2009-06-25 15:28:23
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板不需太多
退火温度可设一个梯度
dNTP浓度是多大的,感觉有点少
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15楼2009-06-25 15:40:59
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
降低退回温度
因为要回收循环次数不能太高最好30以内
可以考虑不回收直接连载体然后挑阳性克隆验证
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16楼2009-06-25 15:46:12
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dailei1983

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是模板量太高了，有时候模板浓度太高会抑制PCR反应。
可以试一下0.5μL，1μL，2μL模板，其他不变，看看有没有分别。
还是不行，就拿第一次产物做模板再做一次PCR，应该就没什么问题了。
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17楼2009-06-25 16:49:37
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
谢谢大家！
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18楼2009-06-25 21:28:03
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yyn0452

木虫 (正式写手)
表达效率低了吧
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19楼2009-06-25 22:01:07
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
表达效率低了？那有没有什么改进的措施呀？
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20楼2009-06-27 18:56:59
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