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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 啤酒酵母同源重组的问题

我在做设计啤酒酵母的同源重组试验,准备上下游各设计300bp的同源臂整合到染色体DNA上,因为要表达外源基因,所以前面准备加上PGK或者ADH启动子和alpha因子信号肽,可老板说那样可能会发生非同源臂重组,就是上述元件可能发生染色体DNA重组情况,我查了一些文献发现不少试验都是这样将线性片段直接插入整合的,想问问大家这样设计可以做吗,能达到预期效果吗?
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

我打算先是在酵母染色体上整合G418抗性基因,然后用我设计好的表达盒替换这个部分,靠的就是两侧同源臂,但是老板说有可能启动子和信号肽部分会同源重组,我不知道这个是否影响我的基因表达和抗性敲除,而且有这个可能吗?
3楼2009-06-23 16:20:01
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在转化产物中非同源重组应该占大多数,但如果你的目的只是表达外源基因,没有整合在你所设计的位点也问题不大,如果想做基因敲除,就需要做PCR或功能筛选了
2楼2009-06-22 15:33:36
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对你这个试验来说最大的干扰因素不是启动子和信号肽部分会同源重组,而是非同源重组
4楼2009-06-23 16:32:36
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

请教一下,你指的非同源重组是什么意思,我不是很明确
5楼2009-06-24 10:05:54
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