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PCR的Tm傎
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师兄当年设计的引物，一个Tm值为63.73，另一个为59.97。我做的时候首选了59度，差不多比最高的低5度吧。可是结果非常的不理想，想要的目的条带很弱，且杂带很多。于是提高温度，可是结果也不行。开始还以为是自己手法的问题了，可是强拉着师兄做一把，结果一样。可是他说当年他确实是P出来了。后来选用了酶切这条笨路，费时费力费药品。 偶然间看他的实验笔记，居然是53度。我抱着试试看的态度，可是一P，真的出来了，还很亮。真没想到Tm值能低这么多。可是想起来很后怕，这样的实验条件一般人都不会往下摸的。。。。。 想与大家分享一下我的经历。。。。请各位专家为小硕以后的科研指条明路。 |
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