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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电击转化大肠杆菌的方法
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07200426

银虫 (小有名气)

[交流] 电击转化大肠杆菌的方法

谁做过电击转化大肠杆菌 啊？能不能给我个转化的步骤啊 ！

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:07 ]
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1楼 2009-06-19 12:08:40
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★ ★
07200426(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0):支持一下！ 6-19 12:56
这个文献应该很多的吧
http://www.baigoogledu.com/searc ... +%B5%E7%D7%AA%BB%AF
赞一下(7人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-06-19 12:43:16
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-6-19 12:43:
这个文献应该很多的吧
http://www.baigoogledu.com/searc ... +%B5%E7%D7%AA%BB%AF

支持一下！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
3楼2009-06-19 12:56:27
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琉璃湖畔

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有做过耶  支持一下哈
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淡定淡定，须知努力就好
4楼2009-06-19 13:01:04
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-6-19 12:43:
这个文献应该很多的吧
http://www.baigoogledu.com/searc ... +%B5%E7%D7%AA%BB%AF

打不开？？
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5楼2009-06-19 13:04:19
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0):非常的具体啊！ 6-19 13:24
第一天：
1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养
2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用
3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

第二天：
4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中
5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
6. 定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次）
7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）
8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）
9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的2/3体积。
10. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
12. 离心，弃上清液
13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞 14. 照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）
15. 用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml
16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存

转化方法:
1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ，冰上培育约5分钟
2. 添加1-3μl DNA ，冰上培育约5分钟
3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中
4. 加载P1000，准备好300μl LB 或 2xYT
5. 对电穿孔容器进行脉冲（200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏）（检查时间常数，应该在3以上）
6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中
7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原
8. 转移细胞至适当的选择培养基上培养
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6楼2009-06-19 13:19:27
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zswx1

嗯  楼上好具体啊   一起学习下
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7楼2009-06-24 21:24:01
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恒星年

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
分子克隆指南上有很详细的步骤
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8楼2009-06-25 09:22:11
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对，精编分子实验指南上特详细，就是没有原理。
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9楼2009-06-25 15:51:22
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07200426

银虫 (小有名气)
谢谢了啊
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10楼2009-06-25 20:05:38
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