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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教pYES2宿主菌的问题
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 请教pYES2宿主菌的问题

我打算用pYES2作为酵母表达载体，请问它是自主复制型的还是整合型载体呢，还有我目前只有青岛啤酒厂的啤酒酵母菌株，是以前实验室买的，我还不清楚它的营养缺陷和呼吸缺陷型，怎么样可以查到它的这些特性？该菌株可以作为pYES2的宿主菌吗？
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1楼 2009-06-19 11:04:04
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pYES2是自主复制的质粒，啤酒酵母可以做为宿主，至于它的基因型，你应该问下你们的实验室
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2楼2009-06-19 16:26:28
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
那我把我的目的基因克隆到pYES2上，在启动子和终止子前后各加同源臂，然后把这一完整的线性片段整合到啤酒酵母染色体上做表达，可以吗？需要在目的基因前面加信号肽吗，pYES2上有信号肽吗？
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3楼2009-06-19 17:23:44
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
按理来说你使用同源臂应该可以整合到酵母基因组上，你可以看一下冷泉港的酵母实验手册里面有如何将基因整合到酵母染色体组上，pYES2上面没有信号肽，你的基因上面应该有信号肽啊，除非你想改变它的定位，才重新做信号肽，
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4楼2009-06-19 18:29:18
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
那我如何找到目的基因的信号肽呢，这个我真不清楚，需要怎么分析，我的目的基因是木瓜蛋白酶基因，是一种蛋白酶
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5楼2009-06-19 21:50:21
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
信号肽，先用蛋白质序列分析软件看看，或者与同源性较高的其他物种有没有定位的参考，给你两个蛋白质定位预测的网址，你看看http://psort.hgc.jp/
http://www.cs.ualberta.ca/~bioinfo/PA/Sub/
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6楼2009-06-19 23:09:55
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
好的，我试试看了，谢谢阿！！！
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7楼2009-06-20 07:23:20
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