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gentychang

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[交流] 再求Giemsa染色的小鼠微核实验的经验

求Giemsa染色的小鼠微核实验的经验,并望留QQ,或加QQ交流(本人 QQ:534906027).本人将致与最真诚的谢意.本人急求,望各位大虾相助.

我的方法是：
（一）材料
体重18g～22g的健康小鼠。
（二）试剂
1．生理盐水
2．Giemsa染液
1）Giemsa原液：Giemsa粉1g，纯甘油66ml,甲醇66ml，先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2h，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中（5月1日做的）。
2）工作液：临用时配制磷酸盐缓冲液（pH6.8）：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水定容至1000ml。
3．甲醇

实验方法与步骤
（一）实验步骤
1．染毒：小鼠腹腔注射（阿霉素）5mg/kg体重。
2．取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取1ml生理盐水（我认为这里只需要冲下细胞和防止细胞脱水，所以我用了生理盐水），将针头插入骨髓腔上段冲洗，用试管接收冲洗液，即成骨髓细胞悬液。
3．离心：1000r/min离心5min，弃大部分上清液，留少许液体，用毛细吸管将细胞团块轻轻吹打均匀。
4．涂片：混匀后的液体滴1滴于载玻片上，血常规涂片法涂片，自然干燥（有的参考上说可以隔夜干燥，有的说必须图片后微干就立刻固定，我都试过效果好像差不多）。
5．固定：玻片标本置于甲醇溶液中固定5min～10min，（我用的是5min，谁能告诉我这里的固定是什么意思，使细胞贴在玻片上？原理是什么？这步操作会不会引起细胞脱水？）晾干。
6．染色：Giemsa原液用磷酸缓冲液按1∶20的比例稀释，染色10min。自来水轻轻冲去多余染液，晾干，镜检。
7．观察

观察是最大的问题，看了很多微核的图片，但在自己的图片中还是不能找到微核，自己的玻片中的东西很多，到底应该把目标集中在什么样的细胞上寻找呢？我拍照了很多可能是微核的图片？不知谁可以帮我看看，具体加QQ534906027聊聊。急切渴望大家的帮助！！！

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