24小时热门版块排行榜    

查看: 481  |  回复: 7
当前主题已经存档。

薄暮云朵

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助:关于连接反应

为什么我每次把目的基因往载体质粒里连的时候,连出来的结果都是基因是反着插进去的,理论上说正向的和反向的连接产物应该是一比一才对,但我每次连的都是反向的,不管是平端连接还是粘性末端连接,我用过两种质粒,都是这样。想不明白原因,向高手求助。

[ Last edited by amisking on 2009-6-15 at 20:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
薄暮云朵(金币+1):谢谢参与
薄暮云朵(金币+1,VIP+0):谢谢 6-15 11:31
如果你是粘性末端连接应该是定向的才对啊!怎么会反向呢?
你是用T载体的吗?还是直接连接表达载体的呀?
平末端连接我做过送了2个正好一正一反。建议多送几个克隆肯定有正向的
2楼2009-06-15 11:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)

对了,有次我RP值不高,送了第五个才是正向的,加油,平末端肯定可以筛到正向的。
3楼2009-06-15 11:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薄暮云朵

银虫 (初入文坛)

我做的是平端连接,测了十个,都是一个方向
4楼2009-06-15 11:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)

我现在做的就是平末端连接,昨天测序结果就是送两个一正一反,你都是反的也太奇怪了,要看你的具体其情况了你能给我仔细讲讲么?你载体和外源片段都是PCR扩增得到的么?
5楼2009-06-15 13:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)


薄暮云朵(金币+1):谢谢参与
加接头,进行粘性末端连接
6楼2009-06-15 15:43:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


薄暮云朵(金币+1):谢谢参与
该用不同的粘端吧
7楼2009-06-15 20:38:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)


薄暮云朵(金币+1):谢谢参与
可能你的基因正向连入载体时,会表达出对细菌有毒的蛋白。
如果你想要正向的,可以做一个菌落PCR,用载体引物和基因引物,这样可以筛到正向的,然后再培养提质粒
8楼2009-06-16 13:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 薄暮云朵 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 272求调剂 +3 材紫有化 2026-02-28 3/150 2026-02-28 22:52 by ms629
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
信息提示
请填处理意见