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lili1130

[交流] 求助:RT-PCR中actin的选择

最近刚开始做RT-PCR,我的材料是萝卜--甘蓝的一杂种异源四倍体,因为这种材料是新物种,萝卜、甘蓝与拟南芥同属十字花科,我不知道怎么在这种新型材料里面找到它组成型表达的基因,以此来作为试验对照。
   因为这事,最近很着急,希望大家给予帮助!
   先谢谢了

[ Last edited by lili1130 on 2009-6-15 at 09:21 ]
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
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lili1130(金币+1,VIP+0): 6-14 19:29
这个应该找表达量稳定的gene吧具体您还得看看别的文献中人家怎么选的!~!~
long,longlong.
2楼2009-06-14 17:11:13
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★
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lili1130(金币+1,VIP+0): 6-14 19:28
actin 是比较稳定的参考基因,如果和拟南芥同源你可以去ncbi的database去查找est或者完整的基因序列
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-06-14 17:33:19
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yfsyyy

银虫 (小有名气)

★ ★
lili1130(金币+1):谢谢参与
lili1130(金币+1,VIP+0): 6-14 19:29
通常选actin作为内参基因,但也有用16SRNA的,可以找相关的文献看看
4楼2009-06-14 19:03:37
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lili1130

文献里面也没有牵扯到这种材料的,材料是新的
5楼2009-06-14 19:29:17
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
lili1130(金币+1):谢谢参与
lili1130(金币+1,VIP+0): 6-15 07:28
你可以选择一种actin,再做一下其与模版量之间的关系,可以做一系列的模版浓度梯度,如果actin没有显著性变化,你就可以用它作为内参
6楼2009-06-14 19:54:55
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350784478

木虫 (正式写手)


lili1130(金币+1):谢谢参与
去搜索一下相关文献,参考一下别人是怎么做的。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
7楼2009-06-14 19:55:12
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
lili1130(金币+1):谢谢参与
lili1130(金币+1,VIP+0): 6-15 07:28
我做的物种亦没有人做过Realtime,我也不知道该使用什么样子的内参,我的做法是这样:选择几种他人常用的内参,这些人发表的时候大多会附上引物,使用自己的RNA来做一下筛选,又或者看一下经常做内参的这几种基因在自己的物种里是否已经有mRNA的序列,如果有直接拿他来设计引物做内参即可
8楼2009-06-14 21:58:53
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shirley7216

木虫 (小有名气)

★ ★
lili1130(金币+1):谢谢参与
lili1130(金币+1,VIP+0): 6-15 07:28
用RT-PCR试剂盒试试。
simon
9楼2009-06-14 22:27:33
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boouy

银虫 (正式写手)

★ ★
lili1130(金币+1):谢谢参与
lili1130(金币+1,VIP+0): 6-15 09:00
建议用northern做参照看Actin基因是不是稳定。
10楼2009-06-15 06:38:35
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