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huangyuan838

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】有没有测定植物叶片内源激素的同学啊

能否告知具体的实验方法啊，谢啦

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1楼 2009-06-13 20:08:55

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younggatt

银虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 作物生理学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
seamuse(金币+2):感谢！ 2010-02-03 20:21

用ELISA方法步骤很多，用HPLC方法造值较高，光标准样的准备就得花你很大一部分钱。我做过的ELISA方法供你参考：
选4棵幼苗，叶片取倒3片全展叶，去叶脉后，每重复称取0.5g；同时剪取根末端白色幼根部分，吸水后每重复称取0.5g，每处理重复3次，加2 mL样品提取液（80％甲醇，内含1.0 mmol•L－1二叔丁基对甲苯酚），在冰浴中研磨成匀浆，转入10 mL试管，再用2 mL提取液分次将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀放在4 ℃冰箱中静置4 h后，以1000×g离心15 min，取上清液过C-18固相萃取柱，再将过柱后的样品转入10 mL塑料离心管中，氮气吹干后储于-20 ℃下备用。测定参照何钟佩[14]书中方法用间接酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked immunosorbent assays， ELISA）检测脱落酸（Abscisic acid, ABA）、玉米素核苷（Zeatin-riboside, ZR）、生长素（Indoleacetic acid, IAA）、茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate, MeJA）和赤霉素（Gibberellin, GA3）含量。