| 查看: 652 | 回复: 0 | |||
[交流]
细胞转染实验注意事项
|
|
1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。 4.培养基中的抗生素 抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低。这时候可以选择Entranster转染试剂，非脂质体试剂，培养基可加抗生素，避免了细胞染菌。 5.设置阳性对照和阴性对照。 6.一般在转染24-48h，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。 7.如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料学调剂
已经有9人回复
-
0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信
已经有5人回复
-
321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二
已经有6人回复
-
调剂
已经有3人回复
-
290求调剂
已经有8人回复
-
材料类求调剂
已经有8人回复
-
材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二
已经有7人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
302材料工程求调剂
已经有4人回复
-
材料化工调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
10