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happyaliii

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[交流] 多肽合成知识已有2人参与

1．多肽合成的基本原理
   答：多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物，合成过程可以连续进行，从而为多肽合成的自动化奠定了基础。目前全自动多肽的合成，基本都是固相合成。基本过程如下：  基于Fmoc化学合成，先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点，同期它的氨基酸的羧基（已经活化）作用形成肽键，不断重复这一过程，即可得到目标多肽。根据多肽的氨基酸组成不同，多肽后处理方式不同，纯化方式也有差异。
   2．关于Antigen Grade 多肽必须在在多肽的一端增加 Cysteine吗？
   答：不一定，偶连的方式与偶连的活化剂和氨基酸组成有关。EDC:  通过C端 COOH连接，一般要求序列中无Glu (E), Asp (D),或an amidated C-terminus；Act. EDC Method: 通过 N端的氨基偶连，要求序列中无Lys (K) 或N端没有被乙酰化；MBS:通过Cys的基团载体中其他 SH连接形成 S-S. 如果序列中无 Cys,就需要添加Cys基团，最好增加在N端。
   3．制备多肽抗体，常用的载体有那些？如何选择？
   答：多肽分子量很小，免疫应答效果差,需要与载体偶连以提高免疫源性。载体大多数为高分量的蛋白质，常用的载体有KLH (铜蓝蛋白)，BSA, OVA等。KLH为首选。 ELISA测定多肽抗体效价时，有些多肽直接包板有困难，需要与BSA等偶连后再包板。
   4．做免疫用的多肽多长为合适？
   答：10-15个氨基酸，当然长一些免疫效果好一些，不过合成费用会上去。10aa以下的多肽免疫效果比较差。
   5．为什么多肽抗体有时不能用于Western Blot? 答：这比较常见，Elisa一般都没有什么问题。
   6．免疫用多肽的纯度要很高吗？
   答：纯度高当然好，但是代价也高。问题是如果纯度为90-95%的多肽能产生抗体，65-75%纯度的多肽，一般也不对失败。
   7．我们合成的多肽溶解性如何？
   答：很难准确预测一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。如果多肽难以溶解就认为多肽合成有问题就大错特错了。那么如何判断多肽的溶解性？
   8．多肽状态如何？如何保存储存？
   答：我们提供的多肽是粉末状，一般为灰白色，组成不同，多肽粉末的颜色有差异。多肽一般需要避光保存。长期保存应保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短时间室温运输。
   9．多肽的量是怎么确定？
   答：一般用天平直接称重。

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