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wkj1015

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助:纤维素酶活测定的问题 已有1人参与

本人利用实验室从酱香大曲中筛选的5株耐高温放线菌测定纤维素酶活,所用培养基:CMC-Na 10g,(NH4)2SO4 4g,Na2HPO4·12H2O4.2g, KH2PO41.4g,  FeSO4·7H2O 0.016g,MgSO4·7H2O 0.5g,蛋白胨3g,酵母浸出物0.162g,蒸馏水1000ml。从斜面上直接挑取少量菌种接种至100ML液体培养基中,在50℃,180r/min条件下,振荡培养3d,经观察,三角瓶中培养基均有大量菌丝体产生,且有两瓶已经浑浊,直接吸取1ml培养液,50℃水浴活化5min后加入4ml0.625%CMC-Na溶液(用PH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液配制,提前也在50℃水浴活化过)在50℃水浴1小时后,立即加入1ml2mol/LNaOH溶液和2mlDNS溶液,在沸水浴中处理5min后用冷水冷却后未变色,与空白样的颜色一致,测不出酶活。反复多次都是不可以。不知道是什么问题?求助。困惑的是观察以CMC-Na为唯一碳源培养后菌株是生产的,而且长的还不错,但是就测不出酶活。有高人能帮忙吗?
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fxin1996

新虫 (初入文坛)

3楼2020-09-20 20:54:19
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以在固体平板上试试刚果红染色,是否具有纤维素酶活性。我之前也遇到过你这样的情况,后来推测是纤维素分解的还原糖被菌体利用了,所以用DSN并没有显色反应。因为当时这个不是主要实验,所以后来就没深究,期待你的结果,愿共同交流学习
2楼2020-01-03 19:03:59
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-01-03 19:03:59
可以在固体平板上试试刚果红染色,是否具有纤维素酶活性。我之前也遇到过你这样的情况,后来推测是纤维素分解的还原糖被菌体利用了,所以用DSN并没有显色反应。因为当时这个不是主要实验,所以后来就没深究,期待你 ...

你好,刚果红平板染色有明显的抑菌圈,现在还是很怪,我换了底物测,外切酶有活性,内切和葡萄糖苷酶没有活性……
4楼2021-11-22 23:13:45
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