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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求助：纤维素酶活测定的问题
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助：纤维素酶活测定的问题 已有1人参与

本人利用实验室从酱香大曲中筛选的5株耐高温放线菌测定纤维素酶活，所用培养基：CMC-Na 10g，(NH4)2SO4 4g，Na2HPO4·12H2O4.2g， KH2PO41.4g，  FeSO4·7H2O 0.016g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨3g，酵母浸出物0.162g，蒸馏水1000ml。从斜面上直接挑取少量菌种接种至100ML液体培养基中，在50℃，180r/min条件下，振荡培养3d，经观察，三角瓶中培养基均有大量菌丝体产生，且有两瓶已经浑浊，直接吸取1ml培养液，50℃水浴活化5min后加入4ml0.625%CMC-Na溶液（用PH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液配制，提前也在50℃水浴活化过）在50℃水浴1小时后，立即加入1ml2mol/LNaOH溶液和2mlDNS溶液，在沸水浴中处理5min后用冷水冷却后未变色，与空白样的颜色一致，测不出酶活。反复多次都是不可以。不知道是什么问题？求助。困惑的是观察以CMC-Na为唯一碳源培养后菌株是生产的，而且长的还不错，但是就测不出酶活。有高人能帮忙吗？
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1楼 2020-01-03 12:29:56
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fxin1996

新虫 (初入文坛)
混浊是染菌了吗

发自小木虫Android客户端
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3楼2020-09-20 20:54:19
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以在固体平板上试试刚果红染色，是否具有纤维素酶活性。我之前也遇到过你这样的情况，后来推测是纤维素分解的还原糖被菌体利用了，所以用DSN并没有显色反应。因为当时这个不是主要实验，所以后来就没深究，期待你的结果，愿共同交流学习
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2楼2020-01-03 19:03:59
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-01-03 19:03:59
可以在固体平板上试试刚果红染色，是否具有纤维素酶活性。我之前也遇到过你这样的情况，后来推测是纤维素分解的还原糖被菌体利用了，所以用DSN并没有显色反应。因为当时这个不是主要实验，所以后来就没深究，期待你 ...

你好，刚果红平板染色有明显的抑菌圈，现在还是很怪，我换了底物测，外切酶有活性，内切和葡萄糖苷酶没有活性……
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4楼2021-11-22 23:13:45
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