24小时热门版块排行榜    

查看: 185  |  回复: 1
当前主题已经存档。

维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 一个做酿酒酵母的新手,请教大家了!

我是一个做酵母表达的新手,有很多地方需要请教,现在实验室给我一个青岛啤酒厂的啤酒酵母菌,需要做敲除整合染色体DNA,但我之前做的木瓜蛋白酶需要先克隆到一个表达载体上,然后我再用酶切或者PCR方法得到含有启动子,信号肽,木瓜蛋白酶,终止子以及两端同源臂的一个片段,最后整合入染色体做表达,可我不知道该怎么样选择表达载体可以得到上述片段,请大家指教指教,十分感谢!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iaminxanadu

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果你知道你的酶已经在酿酒酵母里有功能了,可以直接用克隆载体。随便选了,最常用的pUC18。。。等你构建好了表达盒,设计带有靶位置同源序列的大引物,扩增表达盒后得到片断直接转化酿酒酵母单倍体, 涂木瓜蛋白平板?

或者先在靶位置插入一个显性筛选marker,比如卡那抗性,之后构建表达盒。。。。替换这个抗性marker 涂平板,影印或者挑菌落划半。。。
2楼2009-06-12 17:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 维纳斯的骑士 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 3/150 2026-03-25 10:45 by hxsm
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-22 6/300 2026-03-25 09:14 by aa331100
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见