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speker

铁虫 (初入文坛)

[交流] 请教一下二次PCR?

最近由于模版珍贵,需要做二次PCR,片段在1500bp,但是无论怎么稀释都做不出来,请高手指点一下!
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

把问题说说清楚
帮助虫友,提升自己
2楼2009-06-10 23:03:25
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做个梯度PCR?试剂问题?
3楼2009-06-10 23:37:25
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cejw

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
装到T载体里试试?   

摇菌提质粒,想要多少有多少   


4楼2009-06-11 05:03:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议使用巢式PCR
不然有可能得到的只是一堆dimer
5楼2009-06-11 09:46:30
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用pcr产物再做一次pcr,反正已经知道目的片段的大小
6楼2009-06-11 14:01:41
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jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
巢式pcr要两套引物,如果模版的序列知道的话没有必要这么浪费吧
毕竟合成引物要钱的,做两轮pcr或者做个ta克隆应该是很比较好的办法
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
7楼2009-06-11 14:04:08
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

合成对引物也就几十元,用内外引物的意义还在于能够避免杂带产生
8楼2009-06-11 14:36:50
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)

俺个人认为也是TA比较好啊~~~
long,longlong.
9楼2009-06-11 15:07:12
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381466632

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
二次PCR 容易错配。我们组是设计巢式引物验证的。
要是想验证大小可以回收,以产物为模板再PCR 。
10楼2009-06-13 19:00:05
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