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信天谨游

新虫 (正式写手)

[交流] 求助,蛋白条带跑散了怎么办 已有1人参与

实验新手,这个问题困扰了好久,感谢大家给予意见。
我跑电泳Marker 每次都没有问题,纯的蛋白跑出来也没有问题,条带清晰。用10%的胶,但是用表面活性剂和盐处理过得蛋白都会跑散,也没有条带出来。我的目标蛋白分子量是66K 的,但是PEG6000在水中的水化半径为25-35K ,有什么好的办法除去PEG吗?

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信天谨游

新虫 (正式写手)

用过TCA 沉淀法还有硫酸铵沉淀法都会分相,丙酮沉淀法PEG会析出,还有10K 超滤膜,还有14000的透析袋都透不过PEG 。试过很多方法了,实在没办法了,一直卡在着。各位老师有什么建议吗?

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2楼2019-12-03 16:55:45
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信天谨游

新虫 (正式写手)

PEG可以溶于水也可以溶于乙醇,用无水乙醇900ul加100ul含PEG 的样品,发现有PEG析出,可能是溶解度没那么高吧。但是不知道此时蛋白有没有沉淀,那我是不是可以离心之后,再用无水乙醇去沉淀一次,把没融的PEG去除了。不知这样是否可行,因为不确定这样的话乙醇还能否起到沉淀蛋白的作用?

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3楼2019-12-03 17:00:50
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asdfjpj

银虫 (著名写手)

time is a river
4楼2019-12-05 08:45:22
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