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liaoyongqiang

银虫 (正式写手)

[交流] 酵母双杂交

我现在正准备做酵母双杂交,遇到一个问题就是,在配置缺陷培养基的是否要加入抗生素,例如我构建的BD重组载体抗卡那霉素,那么在转化重组质粒的时候,要涂布到缺陷培养基平板上培养,是否要在缺陷培养基里面加卡那霉素?
        向各位师兄师姐请教!小弟感谢不尽!

[ Last edited by amisking on 2009-6-10 at 12:01 ]
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认真做学术,开心生活。
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)


liaoyongqiang(金币+1,VIP+0):哦,谢谢,我的是有缺陷菌 6-10 15:40
你的缺陷菌如果有卡那抗性就可以加
2楼2009-06-10 14:27:23
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灿烂的笑脸

新虫 (初入文坛)

质粒有抗性就需要加
3楼2009-09-17 09:52:37
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银杏下

金虫 (小有名气)


liaoyongqiang(金币+1,VIP+0): 9-19 15:19
不需要加,所谓抗性是在大肠杆菌中构建质粒需要加的抗性,而在转化酵母时kana不能起到筛选作用,所以才需要用缺陷型。对于这种穿梭质粒要特别注意各个区域所对应的宿主作用。
4楼2009-09-17 13:10:48
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lzhwin

木虫 (正式写手)

楼上正解

楼主好像没有仔细读那个GBK质粒的说明书啊。卡纳用于大肠杆菌筛选,在多克隆位点前面那段才是导入酵母后的筛选基因
5楼2009-09-19 21:36:29
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

你的缺陷菌如果有卡那抗性就可以加
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
6楼2009-09-20 01:05:39
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