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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] 大家帮忙分析一下质粒为啥没提出来

这是挑的单菌落溶菌酶+碱裂解法提乳酸菌质粒(应为2kb)
溶菌酶终浓度10mg/ml 37度作用1小时
电泳没得到条带 梳孔是不是杂蛋白呀?

唉 提了好多次都是这个结果
很郁闷
请大家帮忙看看!

[ Last edited by wordsworth3180 on 2009-6-9 at 20:56 ]
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

补充一下 marker是最大是2kb
2楼2009-06-09 18:21:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

我倒是感觉你提出来了,就是下面那一大坨smear
主要是加buffer 2和3的时候一定要非常轻柔地混匀而且要混得很均匀,否则就大量地断同时还会污染gDNA
3楼2009-06-09 19:38:32
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

以前提G-质粒挺顺利的
从没出现过这种情况的
我没加RNA酶 前面的会不会是RNA啊?
4楼2009-06-09 19:58:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我汗,这也是有一定可能性的
不过就算是RNA也不会那么多的啦~
5楼2009-06-09 20:05:44
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

哦 那应该怎样轻柔呢?
我都没用漩涡混合,都是将ep管颠倒混匀的
还用哪里应该注意的?
6楼2009-06-09 20:54:31
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琉璃湖畔

木虫 (正式写手)

被降解了已经~~
淡定淡定,须知努力就好
7楼2009-06-09 20:59:56
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cpu2004

金虫 (小有名气)

可能是降解了吧。。。。
8楼2009-06-09 22:07:25
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

用试剂盒提得结果也是这样
只不过梳子空没用亮条带
那怎样避免降解呢?
9楼2009-06-09 22:08:20
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cpu2004

金虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不会是压根就没有质粒,你的单菌落是杂菌。。。。这个。。。
10楼2009-06-09 22:09:55
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