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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母摇瓶培养过程中的染菌问题
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风荻

金虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母摇瓶培养过程中的染菌问题

各位大侠：
       我现在在培养巴斯德毕赤酵母，想通过它检测实验室的酶活，可是在摇瓶培养中，酵母老是染菌，酶活直接掉0，很郁闷。
       请大虾们多多指教，在摇瓶过程中都有哪些环节可能染菌啊！不胜感激！


附：我的简要步骤
       YPD平板上得单菌落，PA瓶摇活16-18h，BMGY菌体扩培24h左右，10ml离心管无菌离心的菌体，转入BMMY，每隔24h加一次甲醇。（摇瓶为50ml培养液/500ml锥形瓶）

[ Last edited by 风荻 on 2009-6-8 at 15:41 ]
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1楼 2009-06-08 15:39:46
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austin2008

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1 首先检查你的培养基灭菌是否彻底
2 PA瓶摇活的时候注意盖子不要太松，另外摇床里面是否干净（建议隔一段时间清洗消毒一次），有没有同时培养易产孢子的真菌！
3 你的YNB和生物素以及磷酸盐，甘油，甲醇等过滤除菌是否彻底，配置BMMY和BMGY的时候是否按照无菌操作进行的
4. 离心以后转入BMMY的时候是否小心，最好用1mL无菌水吹打混匀后加入
5. 加甲醇的时候是否严格按照无菌操作来的，加入的甲醇是否是无菌的

在确保菌种没有问题的情况下严格检查以上几条，应该没有什么问题
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优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
2楼2009-06-08 18:55:06
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andy03802

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我摇这种酵母的时候都是加入硫酸链霉素的，一种光谱抗生素，可以抑制细菌的生长。效果不错，如果要是长时间的发酵，建议隔三五天在补加一次
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3楼2009-06-13 16:40:04
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