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Azure成像让蛋白质磷酸化清晰可见
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WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。 Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达： 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置： 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置： 根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等 4、适当的提取方法： 蛋白质提取的方法不仅影响提取效率，还会影响蛋白的质量。建议采用裂解液裂解和超声破碎组合的方式，可确保整个样本充分裂解。 5、低温操作： 室温条件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。请勿反复冻融，操作时一定置于冰上。 |
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2019-10-18 11:01:05, 206.57 K
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