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liusu05

铁虫 (初入文坛)

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[交流] Azure成像让蛋白质磷酸化清晰可见

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。
Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。
1、样本是否表达：
查阅资料或通过预实验确定。
2、对照设置：
阳性和阴性对照。
总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中，磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。
3、内参设置：
根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等
4、适当的提取方法：
蛋白质提取的方法不仅影响提取效率，还会影响蛋白的质量。建议采用裂解液裂解和超声破碎组合的方式，可确保整个样本充分裂解。
5、低温操作：
室温条件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。请勿反复冻融，操作时一定置于冰上。

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附件 1 : 让蛋白质磷酸化清晰可见.pdf

2019-10-18 11:01:05, 206.57 K

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1楼 2019-10-18 11:01:11

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