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liusu05

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 激光近红外荧光检测，您想知道的都在这里

Western blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一，自从1979提出至今已有数十年的历史。常用的检测方法有化学发光法和荧光方法。NIR近红外荧光检测方法，印迹膜自发荧光较低，信噪比高。NIR荧光检测能获得高信噪比和高质量图片主要依赖于激发强度大，精密的激光光源和专业的光学元件。我们Azure C500和600成像系统带有双激光光源，我们来看下激光光源能给我们带来哪些好处。

1. 激光光源更容易达到染料的吸收峰

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2.窄光谱激光减少光泄漏的产生

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3.激光检测在更短时间内实现更高信噪比

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4.激光检测具有较低的背景

如果您有带有激光激发的近红外荧光成像系统，那么您还可以进行很多其他实验哦，如下但不限于：

◐ 双色印迹膜成像：用于精准定量，满足期刊杂志需求

◐ in-cell western检测实验：传统的western blot对于一些大分子量的蛋白检测具有局限性，近红外染料的问世，可以在细胞培养板上进行in-cell western检测，省去了电泳，转膜等等繁琐的步骤，根据孵育二抗所发出荧光信号进行检测；还可以用于药物筛选，FDA已经规定胰岛素和一些抗肿瘤药物的体外效价评价标准使用此方法

◐ EMSA（凝胶迁移或电泳迁移率检测）实验：红外荧光技术可以解决EMSA实验中探针示踪问题，还可以进行双色标记检测竞争性结合；

◐ 活体成像：近红外荧光染料具有良好的组织渗透性、无毒性和无放射性等特点，可以真正无损伤的研究活体动物体内肿瘤的生长及转移，感染性疾病发生发展过程或者监控活体生物体内的细胞活动和基因表达，有效的研究观测转基因生理过程等。在这点上别拿我们家宝宝与轻（zhuan）奢（yong）品（jiqi）比，你懂的。

◐ 组织切片成像：使用IRDye®抗体或荧光探针，根据标准的免疫组织化学实验协议进行标记，可以在宏观层面上进行实验分析，组织切片红外成像优势在于可以在使用显微镜之前宏观快速浏览感兴趣的部分；可进行两通道标记，进行多重标记检测；可对染色部位进行定量分析等。

◐ 微印迹分析(micro-western arrays):能够将western blot的特异识别能力和DNA芯片检测的高通量能力结合起来，帮助实验者一次实验可观测到细胞中各种蛋白之间的网络系统，节省每次反复实验的人力和物力。这种方法是利用预制的micro-western胶（包含96个微胶）来预印细胞裂解物，进行半干式转印，将样品转移到NC膜上或PVDF膜上，进行封闭，近红外二抗孵育，使用近红外成像系统进行成像，这种新技术，可用极少样品和抗体分析大量数目不同蛋白的变化，极适合研究干细胞、癌细胞、组织发育等过程中的信号传导路径的变化。

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