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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 发光后为黑色背景为什么/
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mm040522

金虫 (正式写手)

[交流] western blot 发光后为黑色背景为什么/

今日做Western ,发光后目的基因没有条带，是一片黑色背景，但内参尚可。
弱问有经验的虫子，原因何在？
有谁碰到过这种情况？
抗体的问题，还是封闭时的问题？如何改进？
谢谢。

[ Last edited by mm040522 on 2009-6-7 at 00:13 ]
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1楼 2009-06-05 16:28:58
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
mm040522(金币+1,VIP+0):多谢帮助 6-7 00:12
有可能是封闭的问题，有可能是显色时间太长，
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52187644
2楼2009-06-05 17:39:41
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-5 23:19
mm040522(金币+1,VIP+0):谢谢帮助 6-7 00:11
内参可以，可以排除曝光过度或者操作失误。你可以试试5%milk 封闭过夜，一抗4度缓慢摇动过夜，用TBST多洗几遍，还有用新的抗体，多试几个稀释倍数。
引用回帖:
Originally posted by mm040522 at 2009-6-5 16:28:
今日做Western ,发光后目的基因没有条带，是一片黑色背景，但内参尚可。
弱问有经验的虫子，原因何在？
有谁碰到过这种情况？
抗体的问题，还是封闭时的问题？如何改进？
谢谢。

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3楼2009-06-05 23:10:42
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
背景颜色较重的原因很多，参看这个帖子
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1295212
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-06-05 23:31:11
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mm040522

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by baisuilan at 2009-6-5 23:10:
内参可以，可以排除曝光过度或者操作失误。你可以试试5%milk 封闭过夜，一抗4度缓慢摇动过夜，用TBST多洗几遍，还有用新的抗体，多试几个稀释倍数。



只有抗体不是新的，其他的方法都用过了。谢谢哦。
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5楼2009-06-07 00:10:54
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jiahaitao1016

金虫 (小有名气)
★
mm040522(金币+1,VIP+0):谢谢交流 6-14 15:49
用PBST洗膜3次，每次10min，如果还有的话就多洗一下。洗的时候摇床速度可以大一点。
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6楼2009-06-14 01:14:49
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