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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » pCas和pTargetF质粒用于基因编辑
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D.ypm

新虫 (小有名气)

[交流] pCas和pTargetF质粒用于基因编辑 已有2人参与

pCas和pTargetF质粒用于大肠杆菌基因编辑时，前面各项步骤都没有问题，最后一步菌落PCR验证敲除菌株时，总是得不到想要的大小条带，望做过这类实验的童靴可以提供一些建议。
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1楼 2019-10-13 09:21:05
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
就是不好敲除

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2楼2019-10-13 14:05:26
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D.ypm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-10-13 14:05:26
就是不好敲除

为什么呢

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3楼2019-10-13 23:10:36
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大神救救我

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个是没敲掉吧，验过致死率了吗

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4楼2019-10-13 23:59:41
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D.ypm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 大神救救我 at 2019-10-13 23:59:41
这个是没敲掉吧，验过致死率了吗

没敲掉，也应该出现没敲掉的条带呀

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5楼2019-10-14 18:40:47
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大神救救我

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by D.ypm at 2019-10-14 18:40:47
没敲掉，也应该出现没敲掉的条带呀
...

那你是一条带都没有，还是出现非特异性扩增啊。反正不管出现什么问题，都是pcr出问题了。建议你把pcr条件改一下

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6楼2019-10-14 19:36:28
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D.ypm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 大神救救我 at 2019-10-14 19:36:28
那你是一条带都没有，还是出现非特异性扩增啊。反正不管出现什么问题，都是pcr出问题了。建议你把pcr条件改一下
...

PCR条件都是按文献来的，不应该出现问题吧
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7楼2019-10-16 12:04:47
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