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新手请教各位前辈： 1。超声破碎会把大肠杆菌诱导表达的目的蛋白质片段打碎从而影响其活性吗？我在大肠杆菌中诱导的是蛋白磷酸酶，一种融合蛋白，要保持其活性，请问用哪一种常规破碎方法比较好？ 2。Ni-NTA过柱需要那些填料？麻烦高手您给说细致些，谢谢。 3。本人在做一种蛋白磷酸酶,所买试剂盒的缓冲液呈碱性,是8.4,与我酶的等电点（7.2）不符合, ,问要在这种情况下操作使该酶不失活,并且得率可以，该如何操作或者是改变什么条件?谢谢了. 4。过普通大小的镍或钴凝胶层析柱，需要摇多少菌就可以？ 5。镍柱和钴柱都可以进行组氨酸标签蛋白质的纯化，在纯化一个组氨酸标签的融合蛋白（酶）两者可以互换吗，前者换为后者是否影响活性？如果不能，有什么条件限制？ [ Last edited by amisking on 2009-6-3 at 20:43 ] |
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longjianer
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3楼2009-06-03 22:20:53
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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实验要做过才知道，很多条件是要自己摸的，每种实验的具体情况都不一样，lz还是自己摸索吧。不过关于你的问题还是给你点提示吧。 问题1，一般不会打断目的蛋白，但是部分蛋白失活是很正常的，但是全菌蛋白很多，不在乎那一点。但是具体哪种方式适合，自己查文献去。 问题2，这种问题还要问别人，你读书做什么？很多大公司的填料或者预装柱关于这些东西，说明书都是写的明明白白的。查一查，有具体点的问题再问。 问题3，如果缓冲液在你的蛋白的等电点岂不是就沉淀了？高那么一点点pH，就会让你的酶失活？动动脑子绝对不会问这样的问题，如果想不通就是专业书没有读够。 问题4，这种问题别人随口就回答出来，不是课题设计有问题，就是回答问题的人有问题。 问题5，我无语了。做实验不是体力活…… |
2楼2009-06-03 22:02:09
4楼2009-06-04 01:36:40
5楼2009-06-04 08:23:13
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