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chunyan金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】TNBS法测定蛋白质的步骤
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我想用TNBS法测定氨基含量，但找不到中文文献的具体操作方法和步骤，哪位虫友有这个方法啊，谢谢！ [ Last edited by chunyan on 2009-6-4 at 09:59 ] |
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2楼2009-06-05 08:49:43
zsyaoyao
金虫 (小有名气)
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2.3.3. 5 TNBS法 三硝基苯磺酸(TNBS)与蛋白表面的赖氨酸e一氨基发生反应，该反应生成三 硝基苯衍生物在424nm有特征吸收峰，通过该反应可以确定蛋白质的自由氨基数 目。以BSA作工作曲线，按每分子BSA有60个游离氨基计:氯霉素与BSA连接 数=60-CAP-BSA结合物游离氨基数。具体操作如下所示: ①加0.2, 0.4, 0.6, 0.8, lml的BSA C lmg/ml )溶液于试管中。 ②将每个试管用去离子水稀释至lmla ③每个试管中加入1 ml硼酸缓冲液(O.1M, pH8.5)o ④每个试管中加入I ml TNBS o ⑤混匀，温浴40 0C，反应I OOmin o ⑥在424nm测OD值(参比:1 ml O. I %TNBS , I ml buf}'er, 1 ml水同样条件反应)。 ⑦测样:I mI样品(lmg/ml) +1m1 buffer+lml TNBS同样条件下测试)。 具体参考 2005年硕士论文“氯霉素全抗原的合成及其卵黄抗体的分离纯化” |
3楼2009-06-06 00:20:03