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d271828

银虫 (小有名气)

[交流] 急求转化问题,谢谢

大家好,我要表达一个已知序列的基因,PCR后连接到pETBlue2载体上,转化大肠杆菌DH5a,验证后,送去测序,测序结果显示连接正确。然后我就提取该重组大肠杆菌DH5a的质粒转化至大肠杆菌DE3做表达(利用amp抗性筛选),奇怪的是怎么都转化不成功,每次都是长到三天才有菌落出现,而这时amp已经失活,长出来的都是杂菌,恳求高手指点。谢谢了!
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d271828

银虫 (小有名气)

培养基和感受态都没有问题的,我用其他质粒都可以转化成功的
2楼2009-06-02 22:31:12
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)

★
d271828(金币+1,VIP+0):谢谢 6-3 16:48
是不是你质粒抽提有问题啊?从DH5a里抽出来的质粒你浓度定量过吗?同时设置阳性阴性对照检测一下。
3楼2009-06-03 08:34:24
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