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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：包涵体复性时蛋白又全部沉淀
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kxxin66

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：包涵体复性时蛋白又全部沉淀

我的蛋白的等电点是7.4，在变性又复性（透析复性）之后发现蛋白又沉淀了，透析的梯度是8M、6M、3M、2M、1M的尿素，里面加了GSSG和EDTA及tris-HCl, 最后用的20mM tris pH8.4.请您指点一下是哪些原因？谢谢！！

[ Last edited by amisking on 2009-6-2 at 21:12 ]
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1楼 2009-06-02 16:05:36
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
沉淀是正常的，透析的话因为你的尿素浓度降低，所以，蛋白会逐渐沉淀下来，加loading buffer 之后再变性就全部溶解了
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-06-02 16:55:47
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
产生沉淀就说明没有成功复性
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3楼2009-06-02 17:22:43
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humants

金虫 (正式写手)
道白浓度太高了吧!!最好在0.1mg/ml
左右
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4楼2009-06-02 20:12:09
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cloudy3197

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
或许lz的透析液可以试试所谓的“万金油buffer” 配方如下：
50mM Tris pH 7.9
0.5mM EDTA
50mM NaCl
5% glycerol
个人觉得其中甘油很重要 可以适当提高些比例

p.s.之前做过一小段时间的蛋白纯化，用的就是这个 效果还行
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5楼2009-06-02 21:10:34
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kxxin66

金虫 (小有名气)

谢谢各位热心人

我的蛋白浓度应该是太高了，透析完离心（18，000r/min)后上清的蛋白含量还在0.9mg/ml。同时再向五楼致谢。
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6楼2009-06-03 11:11:38
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