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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » Pcr错配产生是否会影响目的基因的表达？
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Starrylk

铁虫 (初入文坛)

[求助] Pcr错配产生是否会影响目的基因的表达？ 已有2人参与

本人研究生一枚，刚刚入门分子，构建了第一个质粒，但是由于实验室的条件限制，并没有用高保真taq酶扩增目的基因。用的是takara普通的taq酶，目的基因扩出来测序过一次，1800bp里错配10个碱基（已经去除引物序列）。所以想问问，错配会不会导致目的基因表达的时候，氨基酸序列变化，从而导致目的基因表达的酶缺乏应有的活性，致使实验失败？

求各位大佬们，帮忙回答一下

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1楼 2019-09-04 00:06:36
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水杯小一

金虫 (小有名气)
把测序的DNA序列读一下，看看有没有终止密码子突变存在；之后将测序后的DNA序列翻译成蛋白序列，用翻译后的蛋白序列跟原来的蛋白序列比对，看看有没有改变的，如果有改变，重新构建质粒吧。
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2楼2019-09-04 11:33:06
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以构建好再去测序，可以得到很多单克隆，里面可能有不是突变的单克隆。TAKARA的taq酶还可以的，1800左右的片段也不是很大。你可以再试试。10个碱基的突变很有可能导致氨基酸突变。可以翻译成氨基酸比对一下。三联密码子有可能导致无义突变。
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3楼2019-09-06 08:02:43
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JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你需要对酶蛋白进行表达，目的基因扩增就不能错！所以得用高保真酶

Proofast™ Max Super-Fidelity DNA Polymerase扩增长片段不错
还不错，我师姐在Science Advances发的文章就用这个。DOI: 10.1126/sciadv.aaw8451
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4楼2020-03-11 15:31:54
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