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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助提取小牛胸腺DNA时溶液粘度大，有胶状物的问题
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liontears

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助提取小牛胸腺DNA时溶液粘度大，有胶状物的问题

在用教科书的方法（浓盐法，氯化钠，柠檬酸钠）提取小牛胸腺DNA时，最后在乙醇沉淀DNA的时候，发现DNA上会结合有好多胶状粘稠物质，能在水中部分溶解（不知道这些东西是胶原蛋白？脂肪或多糖类？），用乙醇反复洗也无法去除，最后侧OD260/280为1.7-1.8之间。尝试加大溶剂体积和减少小牛胸腺原料，但都未解决问题。在网上查了一些资料，又尝试了以下附加步骤：
加入蛋白酶K，37度或55度一段时间后再反复用酚氯仿提取；
用乙醚提取DNA；
在水或者是70%，95%，100%乙醇中沉淀；

都没能解决问题。希望有高手帮忙！非常感谢！
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1楼 2009-06-02 13:29:08
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liontears

金虫 (初入文坛)
我还试了在DNA水溶液中加入两倍体积无水乙醇和十分之一体积 3M 的NaAC，沉淀DNA，但还是洗不掉那些粘稠的东西。
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2楼2009-06-02 14:09:07
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liontears

金虫 (初入文坛)
期待神一样的大侠降临！
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3楼2009-06-04 13:16:36
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
liontears(金币+1,VIP+0):谢谢领导啊 6-4 16:58
引用回帖:
Originally posted by liontears at 2009-6-4 13:16:
期待神一样的大侠降临！

又神又大侠啊！帮你置顶下，看看对你有没帮助！
赞一下(4人) 回复此楼
如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
4楼2009-06-04 13:34:45
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2008116068

木虫 (著名写手)
★
liontears(金币+1,VIP+0):谢谢！ 6-7 11:59
用TE 溶解DNA，然后吸取上清不行吗？
赞一下(4人) 回复此楼
只要踮起脚尖，就离太阳更近一点！！！
5楼2009-06-07 09:27:16
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liontears

金虫 (初入文坛)
用TE试过了，但是把悬浮的胶状物分离后，再次沉淀DNA的时候还是会出现胶状物，而且DNA浓度会非常低，所以我想在前面的提取过程去掉这些胶状物。非常感谢您的回帖！
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6楼2009-06-07 11:59:33
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2008116068

木虫 (著名写手)
跑电泳。那做个切胶回收试试
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只要踮起脚尖，就离太阳更近一点！！！
7楼2009-06-07 14:37:17
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