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liontears

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助提取小牛胸腺DNA时溶液粘度大,有胶状物的问题

在用教科书的方法(浓盐法,氯化钠,柠檬酸钠)提取小牛胸腺DNA时,最后在乙醇沉淀DNA的时候,发现DNA上会结合有好多胶状粘稠物质,能在水中部分溶解(不知道这些东西是胶原蛋白?脂肪或多糖类?),用乙醇反复洗也无法去除,最后侧OD260/280为1.7-1.8之间。尝试加大溶剂体积和减少小牛胸腺原料,但都未解决问题。在网上查了一些资料,又尝试了以下附加步骤:
加入蛋白酶K,37度或55度一段时间后再反复用酚氯仿提取;
用乙醚提取DNA;
在水或者是70%,95%,100%乙醇中沉淀;

都没能解决问题。希望有高手帮忙!非常感谢!
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liontears

金虫 (初入文坛)

我还试了在DNA水溶液中加入两倍体积无水乙醇和十分之一体积 3M 的NaAC,沉淀DNA,但还是洗不掉那些粘稠的东西。
2楼2009-06-02 14:09:07
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liontears

金虫 (初入文坛)

期待神一样的大侠降临!
3楼2009-06-04 13:16:36
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主


liontears(金币+1,VIP+0):谢谢领导啊 6-4 16:58
引用回帖:
Originally posted by liontears at 2009-6-4 13:16:
期待神一样的大侠降临!

又神又大侠啊!帮你置顶下,看看对你有没帮助!
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2009-06-04 13:34:45
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2008116068

木虫 (著名写手)


liontears(金币+1,VIP+0):谢谢! 6-7 11:59
用TE 溶解DNA,然后吸取上清不行吗?
只要踮起脚尖,就离太阳更近一点!!!
5楼2009-06-07 09:27:16
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liontears

金虫 (初入文坛)

用TE试过了,但是把悬浮的胶状物分离后,再次沉淀DNA的时候还是会出现胶状物,而且DNA浓度会非常低,所以我想在前面的提取过程去掉这些胶状物。非常感谢您的回帖!
6楼2009-06-07 11:59:33
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2008116068

木虫 (著名写手)

跑电泳。那做个切胶回收试试
只要踮起脚尖,就离太阳更近一点!!!
7楼2009-06-07 14:37:17
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