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五毛大肥猪

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化 已有1人参与

有无小伙伴用pcold TF表达过重组蛋白？有没有遇到杂蛋白和重组蛋白一起洗脱下来的情况？想知道大家都用什么洗脱条件！我已经试了3次了都是没法分离出来。。

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1楼 2019-09-01 11:44:03
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
先用硫酸铵分级沉淀

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2楼2019-09-01 16:12:33
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
3楼2019-09-08 11:22:19
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五毛大肥猪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小木无虫 at 2019-09-08 11:22:19
再进行分子筛

我是按着文献上先用20mM咪唑洗脱杂蛋白，然后直接用500mM咪唑洗脱目的蛋白。但是20mM咪唑根本没办法把杂蛋白洗脱下来 我在20-500中间试了很多梯度都没洗干净不知道咋办了现在

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4楼2019-09-08 21:13:26
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x8210324

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Ni柱纯化很难一步就到纯度很好的，目前你要么换一种亲和力弱一点的TED-Ni，要么拿你已经纯化出来的继续用离子或者疏水层析纯化
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5楼2019-09-12 14:46:20
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