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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：离子交换层析！！
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maoer6221

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助：离子交换层析！！

各位有谁做过离子交换层析的，帮帮忙~~~QQ695759006
在这儿先谢谢了~~

[ Last edited by amisking on 2009-6-6 at 15:44 ]
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1楼 2009-06-02 10:02:42
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lujun01

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你告诉我你具体遇见了什么问题?是设备还是方法问题?
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2楼2009-06-02 10:12:29
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DLLB

金虫 (小有名气)
做过，出什么问题了
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3楼2009-06-02 10:28:58
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maoer6221

新虫 (初入文坛)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-4 18:43
乙酰胆碱酯酶纯化,DEAE-Sephadex A-50,Pharmaci公司,加入用含有
0.05 mol·L-1NaC1的40 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH值7.0)平衡过的DEAE-Sephadex A-50层析柱(1.6cm×40 cm),依次用含有0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、
0.30、0.35、0.40 mol·L-1NaCl的40 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH值7.0)进行梯度洗脱,流速3～4 mL·min-1,每个梯度收集15管,每管收集3 mL。
但是到第一个浓度就穿出了，降低Nacl浓度到0.01M也不行，请问是什么原因？
另外，昆虫体内的乙酰胆碱酯酶的等电点是多少呢？
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4楼2009-06-04 18:15:32
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loveedward

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果阴离子的不行的话，你试试用弱阳的离子交换柱。另外你应该用小试管法测定一下大概多少的ph能够吸附上去。
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5楼2009-06-05 16:13:38
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
乙酰胆碱酯酶的等电点，你可以查找一下相关的文献，应该很多的吧？你把缓冲液的pH调高一些，你用的是步进式洗脱，没有必要把浓度差设这么小吧？为什么不用线性梯度洗脱？
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6楼2009-06-05 17:24:25
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连目标蛋白的等电点都不知道就敢上柱
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7楼2009-06-05 17:25:47
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maoer6221

新虫 (初入文坛)
- -b...我照文献上做的。。。昨天跟试剂公司联系了，好像是离子交换层析要先用不加Nacl 的缓冲液先洗涤2-3个柱体积，然后再洗脱。。。我是本科生来着，我们学校以前也没人做过这个。。。。
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8楼2009-06-06 13:58:01
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maoer6221

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by loveedward at 2009-6-5 16:13:
如果阴离子的不行的话，你试试用弱阳的离子交换柱。另外你应该用小试管法测定一下大概多少的ph能够吸附上去。

小试管法具体怎么做？？谢谢告知
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9楼2009-06-07 18:41:40
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loveedward

银虫 (小有名气)
如果你用的阴离子交换柱，先在小试管中加入等量的树脂，再用不同PH的缓冲液反复洗涤树脂（这在正式实验中相当于平衡），这一步所花的时间比较长，也是成败的关键。当将不同试管中的树脂用不同的缓冲液平衡好了以后加入少量样品 ，是样品吸附到树脂上。然后在检测上清液中酶活，没有检测到酶活的那一管基本上就是吸附完全了。不过一般进行实验的时候还要在小试管侧得的PH上在提高一个单位，以防万一。
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10楼2009-06-14 17:59:32
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