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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 要崩溃了。。。。DNA基因组提取问题
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)

[交流] 要崩溃了。。。。DNA基因组提取问题

已经做过几次DNA提取了，但是都没有 结果，用蛋白酶k处理过夜后，buffer都没有变粘稠

我的具体步骤：

材料：草鱼肝脏组织和肌肉组织，-80度保存

消化液配方：
100mM NaCl
10mM Tris-Cl,(PH=8)
25mM EDTA,PH=8
0.5% SDS
0.1mg/ml 蛋白酶K

取100mg组织，用剪刀剪碎，用1.2ml组织液55度过夜处理

过夜后，组织已经降解，但buffer没有粘稠，用酚氯仿抽提过一次，没有东西，能帮我分析分析吗?

已经重新配过几次试剂了，都是一样，已经不知道该怎么搞了，郁闷
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1楼 2009-06-01 20:42:46
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DLLB

金虫 (小有名气)
提基因组还是用试剂盒吧，我用酚氯仿抽提抽提就没成功
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2楼2009-06-01 21:06:33
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)
先不说抽提，为什么释放基因组这一步我始终没东西啊，郁闷死了
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3楼2009-06-02 08:43:18
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
我用试剂盒提出来效果也不好。手工提成功率更低。
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4楼2009-06-02 08:46:38
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weiwei1

木虫 (小有名气)
组织要研磨吧，不能光剪碎。
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5楼2009-06-02 08:52:40
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
再见苏摩(金币+1,VIP+0): 6-2 14:25
我觉得1. 组织处理不够，还是需要先研磨的2. 基因组提取还是使用Kit吧，我们实验室用MN的还蛮好用的，价格也不贵。
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6楼2009-06-02 09:17:26
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)
问楼上的，MN是什么牌子
另，天根的提基因组的KIT怎么样，有人用过吗
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7楼2009-06-02 10:46:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
再见苏摩(金币+1,VIP+0): 6-2 14:29
你提的gDNA用于做什么实验？
很普通的实验，用国产的天根就够了
如果需要很严格，用QIAGEN的吧
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8楼2009-06-02 10:49:30
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
再见苏摩(金币+2,VIP+0): 6-2 14:25
我做相关实验过夜用37℃，55℃蛋白酶K会不会变性失活？
消化液配置过程中，各组分为分开灭菌吗？（即是否有过高温过程让蛋白酶K失活，配蛋白酶母液是灭菌水也不能超多40℃。）
不研磨，直接减碎也可以，但是最好用小的眼科剪刀，你100mg的量至少剪上半个小时吧。
过夜前，用牙签将组织和消化液混匀，消化其间最好上下颠倒下。
抽提后就能够出东西吗？我记得还需要用冰乙醇（-20℃至少放置4h）让基因组DNA变性才能够析出吧，因为基因组DNA是会溶解于水层的。
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Thank-you，so-blue.
9楼2009-06-02 11:08:47
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)
Tris·Cl我用的别人的，这是我几次配试剂都没变过的东西，决定自己重新配一次
组织预处理改成液氮碾磨
重新再做一次试试，不行的话我就只有买试剂盒了。。。。
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10楼2009-06-02 14:28:43
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