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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物分析
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

[交流] PCR产物分析

大家好，我的片段是3kb ,怎么出现好多非特异性扩增，虽然主要还是我的片段占的量多，这样适合做胶回收和酶切连接实验等后续操作码，谢谢，第一个图片是酶切后纯化图，第一个图是PCR产物图，
pcr产物酶切纯化后，成像显示有点拖尾，适合做连接吗，第二个图显示的还可以做连接吗，
见我的图片，帮我分析下，诚谢！
http://my.muchong.com/space.php?uid=710330&do=album&id=8806

[ Last edited by your2007 on 2009-6-1 at 17:10 ]
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爱人者被爱，敬人者人敬
1楼 2009-06-01 14:11:04
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以。只是要注意连接体系的目的基因与载体的比例。
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2楼2009-06-01 14:24:03
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要看是由于什么引起的拖尾，如果是杂带引起的那肯定不行了，如果是浓度过高引起的拖尾那只要连接的时候把模板的用量降低就可以了。
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3楼2009-06-01 14:35:14
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yuweibest

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也经常遇到这种情况！哪位高手出来指教！谢谢！
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4楼2009-06-01 17:13:38
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jqq1985

银虫 (正式写手)
过柱子纯化后做酶切，然后一定要做一次割胶回收，把目的的条带回收再做连接。
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5楼2009-06-01 18:51:09
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2009-6-1 18:51:
过柱子纯化后做酶切，然后一定要做一次割胶回收，把目的的条带回收再做连接。

就是做完胶回收后做的酶切，然后纯化跑电泳，就成这样了，有点拖尾，
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爱人者被爱，敬人者人敬
6楼2009-06-01 19:04:46
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 19:08
提高退火温度再PCR试一下
出现非特异条带可能是退火温度低造成的
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7楼2009-06-01 19:06:38
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