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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 乳酸菌敲除 LiAc-DTT法
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mengoer

新虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌敲除 LiAc-DTT法

参考文献方法。

1%接种于1%甘氨酸的MRS培养基中，
4小时后取出，
冰浴30min，
以100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5室温下处理30min。

用一下溶液洗涤
bidistilled water 2.0ml, bidistilled water 1 ml,
50 mmol/l EDTA 1 ml,
bidistilled water 1 ml,
0.3 mol/l sucrose 1 ml,
0.3 mol/l sucrose

最后重悬于0.3 mol/l sucrose

我的问题：
1这个方法有没有什么问题

2溶液配制
100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5

LiAc于ddH2O溶解后，如何调pH。必须用醋酸吗?如何灭菌？？有说过滤膜的，也有说121℃ 15min的。
DTT用ddH2O溶解后，过滤膜，分装到1.5mL EP管，放在-20℃冰箱。之后发现有的是管澄清透明，有点是白色的。
以上所有溶液都是调到pH 7.5吗

加甘氨酸的MRS培养基配置方法：0.5M的蔗糖、1%甘氨酸是直接加到MRS中跟着一起灭菌吗??还是分开配置，过滤除菌后再跟灭菌好的MRS混合？？@biostar2009
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1楼 2019-08-22 16:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
这个方法用来敲除枯草芽孢杆菌也可以

发自小木虫Android客户端
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2楼2019-08-24 15:12:42
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