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乳酸菌敲除 LiAc-DTT法
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参考文献方法。 1%接种于1%甘氨酸的MRS培养基中， 4小时后取出， 冰浴30min， 以100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5室温下处理30min。 用一下溶液洗涤 bidistilled water 2.0ml, bidistilled water 1 ml, 50 mmol/l EDTA 1 ml, bidistilled water 1 ml, 0.3 mol/l sucrose 1 ml, 0.3 mol/l sucrose 最后重悬于0.3 mol/l sucrose 我的问题： 1这个方法有没有什么问题 2溶液配制 100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 LiAc于ddH2O溶解后，如何调pH。必须用醋酸吗?如何灭菌？？有说过滤膜的，也有说121℃ 15min的。 DTT用ddH2O溶解后，过滤膜，分装到1.5mL EP管，放在-20℃冰箱。之后发现有的是管澄清透明，有点是白色的。 以上所有溶液都是调到pH 7.5吗 加甘氨酸的MRS培养基配置方法：0.5M的蔗糖、1%甘氨酸是直接加到MRS中跟着一起灭菌吗??还是分开配置，过滤除菌后再跟灭菌好的MRS混合？？@biostar2009 |
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